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intron5811

铜虫 (小有名气)

[交流] 要做抗体,如何选择用哪段序列来表达蛋白? 已有4人参与

要做抗体,如何选择用哪段序列来表达蛋白?如何保证抗体的特异性?
我是新人,没做过表达蛋白来做抗体。
我有这个基因的序列,但是编码的蛋白很长,有大概一千个AA。 其中很重要的 domain 包括 C 端有一个,N 端有一个,N 端的很长,保守性也挺好,有若干个 HOMOLOG。如果选择N 端的话,会不会保守性不太好呢?或者我应该怎么选择呢?该用多长的片段呢?或者有没有直接的文献可以阅读参考呢?谢谢。
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匿名

用户注销 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+3): 鼓励积极应助! 2012-01-31 19:06:50
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4楼2012-01-31 11:12:30
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lder

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2012-01-31 19:06:39
表达抗体,最重要的是要表达出与抗原结合的区段。因为这部分是直接与你的抗原相结合的,只有正确表达了抗体的抗原结合区才能发挥免疫作用。
    一般抗体与抗原结合的部分为抗体的N段的CDR区。要弄清楚你的抗体抗原结合区,你可以做一个抗原结合表位作图,通过实验测定你的抗体的抗原结合区。也可以查阅文献,看看你的抗体是结合抗原的哪个抗原决定族的。
2楼2012-01-31 10:29:54
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十口心思

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
把你的序列在IMGT中分析一下(或者在BLAST 中的IG blast)
如果要表达全长IG,需要注意 信号肽,抗体的肿链和轻链要分开表达,有的还要注意内含子。
3楼2012-01-31 11:05:54
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intron5811

铜虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2012-01-31 19:07:56
3 楼理解比较对。
“看看针对这个抗原蛋白的表位分析方面的资料,如果从来没有人做过,我就建议你自己做个表位分析吧。可以利用一些展示技术去做。 :
这个不知道怎么做?表位分析?只知道这个基因有个家族, 家族间保守型还挺强的。在别的物种中,这个基因倒是有现成的商业抗体,但老板觉得还是自己的物种里自己表达蛋白做抗体比较好。所以就要我做了。有没有什么文献可以推荐来看看?到底该如何去分析这个序列然后拿出合适的片段去做克隆表达?
5楼2012-01-31 14:07:56
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