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2楼2011-06-07 16:47:49

dream-fish

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693991425(金币+5): 2011-06-08 08:27:12

关于基因选取的问题就要看你做的这几个蛋白质是被人研究过吗？如果别人有研究过公布了序列就直接在NCBI上面去下载序列设计引物就好了。如果没有人研究过，那么就比较困难了，呵呵。

3楼2011-06-07 16:49:45

bio-research

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693991425(金币+15): 2011-06-08 08:28:38
silicare(EPI+1): 2011-06-09 12:36:48

1. I assume proteins of interest are latest, namely other people have little research, because you are going to sequence them.
2. you should get coresponding mRNAs according to those proteins, not DNA.
3. How can you obtain the mRNAs of interest? you should acquire short amino acid sequence of those proteins through mass spectrometry. according to those short amino acid sequence, you can design degenerate oligonucleotide primers, then use those primers to clone genes (cDNA) of interest.
4. clone plasmid construction and sequencing them, or directly sequencing those DNA fragments.
5. you can acquire the amino acid sequence of those proteins according to those DNA sequences through triplet codon.

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4楼2011-06-07 22:32:33

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很明确地告诉你，几个蛋白质，这事情至少要做一年，甚至3年

流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜素论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

5楼2011-06-08 00:25:53

匿名

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6楼2011-06-08 08:26:36

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阿修罗Axuro

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693991425(金币+8): 2011-06-08 15:58:32

首先，你要确定一件事，那就是这几个蛋白质有人研究过没有？还是最新发现的蛋白质？
如果没有人研究过，那就得用4楼bio-research 兄得方法先测部分氨基酸，然后设计引物克隆了。比较复杂。
如果有人研究过，那就很好办了，直接把你的蛋白的名字输入到NCBI的gene或者uncleotide数据库去，就可以得到其序列了，当然NCBI还是要自己看，头次上去的话还是很多地方要摸索。
建议先去NCBI搜索下，如果搜索得到当然好，搜索不到那就麻烦点吧。

如果可以的话，楼主可以把那几个蛋白告诉我，我可以帮你搜索下。

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693991425

7楼2011-06-08 08:46:16

匿名

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8楼2011-06-08 15:57:23

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阿修罗Axuro

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引用回帖:

Originally posted by 693991425 at 2011-06-08 15:57:23:
你好！感谢你的热心帮助，我登陆过NCBI但是内容好多，看的我眼花缭乱，您能帮我查一下有没有人做过牦牛乳αs1和β酪蛋白吗？

刚查了下，可能是我没翻译正确，都没有查到。
你能提供这俩个蛋白的英文名吗？最好是标准翻译的全称。

9楼2011-06-09 09:30:28

阿修罗Axuro

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silicare(金币+4): 很热心~ 2011-06-09 12:37:29
693991425(金币+17): 2011-06-09 18:56:35

Bos taurus casein alpha s1 (CSN1S1), mRNA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_181029.2
Bos taurus casein beta (CSN2), mRNA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_181008.2

这是我查的，你自己看看是不是你要的，只有牛的，没有细分到牦牛的，不知道是不是一样的。蛋白序列和mRNA序列在里面都很清楚了，CDS那里的translation就是翻译的蛋白序列。只能帮到这么多了。

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10楼2011-06-09 09:44:47