| 查看: 5371 | 回复: 21 | ||
[求助]
104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？
|
||
| 我现在要做一个104KD的蛋白，做western blot，想问一下电泳和转膜的电压电流和时间及膜的选择，是选PVDF膜还是NC膜？还有一抗二抗结合时间。 |
回复此楼» 猜你喜欢
某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感
已经有4人回复
-
在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。
已经有3人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有8人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有10人回复
-
人气不行了
已经有11人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有22人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有3人回复
-
2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战
已经有7人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有18人回复
-
我面上完蛋了
已经有14人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
已经有8人回复
- western blot分别做犬血清白蛋白和犬alpha干扰素的一抗、二抗推荐选择，谢谢！！
已经有9人回复
- 请问做Western Blot电转移用的电源可以用SDS凝胶电泳的电源代替吗
已经有3人回复
- 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的
已经有11人回复
- 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
已经有22人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- Western blot 检测胱氨酸谷氨酸转运体蛋白表达
已经有6人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？
已经有13人回复
lengjing1986
木虫 (正式写手)
博士
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3367
- 散金: 50
- 红花: 1
- 帖子: 865
- 在线: 173.9小时
- 虫号: 1357638
- 注册: 2011-07-31
- 性别: GG
- 专业: 动物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-12-17 15:19:50
kittyamanda: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 11:43:24
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-12-17 15:19:50
kittyamanda: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 11:43:24
| 这么大的蛋白其实比较容易做的。我一直在做ubiquitination的实验，蛋白大小从70K-200K不等。我推荐给你的条件是：电泳：80V、30min 让蛋白压一压，平一点，这样你的带会比较好看；然后用100V跑电泳，大概一个半小时就差不多了，具体时间你可以通过Marker观察，电泳电压一定不要太大，否则产生的热量太多，蛋白带就不好看了。转膜过程，80V、100分钟，足够了。做不好找我。这实验很简单的。 |
6楼2012-12-16 15:52:43
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-12-12 08:20:41
lvanmorison
禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2012-12-13 00:15:43
luobugou
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4387.8
- 散金: 14
- 红花: 4
- 帖子: 346
- 在线: 87.7小时
- 虫号: 975172
- 注册: 2010-03-18
- 专业: 糖尿病
4楼2012-12-13 03:50:57
5楼2012-12-13 19:50:24
哈哈大姑爷
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 10354.5
- 散金: 338
- 红花: 103
- 沙发: 1
- 帖子: 9504
- 在线: 512.1小时
- 虫号: 1430164
- 注册: 2011-10-07
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
7楼2012-12-17 00:52:39
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
8楼2012-12-17 15:43:15
porphybaby
金虫 (正式写手)
- 应助: 89 (初中生)
- 金币: 948.3
- 散金: 16
- 红花: 6
- 帖子: 395
- 在线: 87小时
- 虫号: 1162143
- 注册: 2010-12-04
- 性别: GG
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
9楼2012-12-17 17:05:29
10楼2012-12-21 11:17:14
20