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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？
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kittyamanda

新虫 (初入文坛)

[求助] 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？

我现在要做一个104KD的蛋白，做western blot，想问一下电泳和转膜的电压电流和时间及膜的选择，是选PVDF膜还是NC膜？还有一抗二抗结合时间。
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1楼2012-12-11 17:54:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvanmorison at 2012-12-13 00:15:43
我在做108KD的蛋白，100V 1h，我总觉得我的蛋白转膜不够好。不知道你的条件是什么？

我一般是湿法转移70V，2h-2.5h。半干转移是稳流，电流=胶/膜的面积（平方厘米），1-1.5h。转膜效果可以用预染的marker查看。
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8楼2012-12-17 15:43:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-17 15:19:31
大蛋白转得慢一些，比你平时做一般蛋白多转一倍的时间就可以了。如果觉得太慢，适当加大一点电压电流。膜应该都可以吧。我比较喜欢PVDF。抗体结合时间应该与抗体效价有关，和蛋白分子量大小没什么关系吧。
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2楼2012-12-12 08:20:41
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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-12-13 00:15:43
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luobugou

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PVDF膜，100V150min，一抗一般4度过夜，二抗室温1小时
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4楼2012-12-13 03:50:57
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