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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
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lazylord

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题

有人做过分子量为140以上蛋白的western blot吗？湿转转膜条件一般是怎么样的？一般有什么优化条件。。。。
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1楼 2011-03-09 21:45:40
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★
lazylord(金币+1): 2011-03-10 08:38:50
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-12 19:30:39
i have experience in semidry transfer, it takes me 2 hours and 50 mA
never try  ????
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2楼2011-03-09 21:58:17
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lazylord

金虫 (小有名气)
请问你多大的分子量啊？
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3楼2011-03-10 11:19:32
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
60-180kda
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4楼2011-03-10 19:50:46
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wudiguigui99

银虫 (小有名气)
★
lazylord(金币+1): 2011-03-12 15:50:58
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-12 19:30:54
我用的是250mA，大概是1h40min
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5楼2011-03-10 20:10:20
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-12 19:30:59
lazylord(金币+1): 2011-03-14 16:21:08
湿转  得考虑你用的膜孔径的大小来决定转膜时间：孔径大时间短，孔径小，时间长。     180mA
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6楼2011-03-12 19:04:24
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tigertang

木虫 (著名写手)
lazylord(金币+1): 2011-03-14 16:20:47
首选湿转，如果抗体好，应该不难杂。90v/2h 可以了。
如果你的蛋白表达高，140kd， 抗体不错，半干转，也应该没问题！
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7楼2011-03-12 21:43:23
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涛声依旧本人

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主做得怎么样了啊，我现在也遇到问题了哦，问下如果是192KD的呢？
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8楼2011-11-30 19:47:47
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tingtingcome

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
额。。我要做的蛋白是300多。。。
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9楼2012-09-13 15:24:27
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醉虾322

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跑过180的，先用8%的胶跑，电转时200mA，一个半小时。
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10楼2015-08-03 15:54:02
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hanbo87234

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我在日本做的是 低温室 20mv  18个小时
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11楼2015-08-03 16:20:35
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