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autumnfang

金虫 (初入文坛)

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[交流] 关于western blot的小问题

刚开始做western blot ，每次做都是不出结果，我的目的蛋白分子量58kd。
主要问题有1、跑胶之后marker中红色的那一条下面只有两条蓝色的带
2、曝光之后胶片没有任何东西。
[/img][/img]
我在想是不是我电转的时间过长，将蛋白转没了

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1楼2012-04-03 16:11:19

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2011加油

银虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-04-04 13:03:00

做WB问题的出处有太多环节。电泳、电转、一抗/二抗孵育、曝光时间长短、显影液等。你是进行ECL发光吗？首先你先确认发光时看到荧光没有？如果没有，问题极有可能存在于之前的环节。如蛋白的上样量，电泳液的PH，电转的时间，PVDF膜的前处理（最好后面不晾干），一抗、二抗连接的类型是否匹配。现在刚开始尝试做WB，建议你:首先做两块胶，一块用于考染，脱色后若有条带，则另一块用于摸索电转的条件。保证一步步没问题。