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blueghost006

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助Western-bot转膜问题

各位大虾，
小子我初学做Western-blot,做了三次，每次转膜后发现PVDF膜上没有一点MARK痕迹，（转膜前胶上MARK条带非常清楚），我用的是湿转法，100V，45分钟，目标蛋白为41KD，当然接下来的结果就是膜上什么都没有，一片空白，这是怎么回事呀？小子我都快崩溃了，敬请各位大虾指点迷津~~~~

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1楼2011-06-02 21:22:49

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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

2楼2011-06-02 23:02:12

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ET生物人

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-06-03 09:49:31

可能mark和目的蛋白被转移出去了！！你尝试降低电压到90V或减短转移的时间！！

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3楼2011-06-03 09:48:55

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terry130

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good! 2011-06-03 18:30:18

跟楼上观点相反，100v没问题，45分钟只能说短，绝对不算长。marker在这个条件下应该会转过去的。感觉LZ的问题不再这里。看看你的buffer是否正确，如果别人用没问题的话就不是buffer的问题。另外一个容易忽视的事情是在转膜前你的pvdf膜要先用甲醇浸泡几分钟再放到buffer中做夹心。没有甲醇活化的话就会出现你这种情况，不只是marker你的蛋白也转不上去。LZ是不是没有活化？？？

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摒气动方息，宁神心自明。