24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

blueghost006

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 48
帖子: 17
在线: 4.3小时
虫号: 1313134
注册: 2011-06-02
性别: GG
专业: 植物生理与生化

[求助] 求助Western-bot转膜问题

各位大虾，
小子我初学做Western-blot,做了三次，每次转膜后发现PVDF膜上没有一点MARK痕迹，（转膜前胶上MARK条带非常清楚），我用的是湿转法，100V，45分钟，目标蛋白为41KD，当然接下来的结果就是膜上什么都没有，一片空白，这是怎么回事呀？小子我都快崩溃了，敬请各位大虾指点迷津~~~~

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助，Western-Blot转膜不成功已经有22人回复
western转膜问题已经有8人回复
关于western blot转膜已经有20人回复
【求助/交流】western实验时加一抗的问题已经有16人回复
【求助】聚合物成膜问题（要测SEM）已经有36人回复
【求助/交流】southern blot 转膜已经有10人回复
【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题已经有10人回复
【求助】请教磁控溅射金属膜问题已经有23人回复
【求助/交流】转膜已经有15人回复
【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！已经有10人回复
western blot 转膜问题期待高手解答已经有10人回复

1楼 2011-06-02 21:22:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

MolEPI: 5
应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 0.001
金币: 2283.9
散金: 19
红花: 9
帖子: 388
在线: 39.3小时
虫号: 313316
注册: 2007-02-24
性别: GG
专业: 细胞死亡

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good! 2011-06-03 18:30:18

跟楼上观点相反，100v没问题，45分钟只能说短，绝对不算长。marker在这个条件下应该会转过去的。感觉LZ的问题不再这里。看看你的buffer是否正确，如果别人用没问题的话就不是buffer的问题。另外一个容易忽视的事情是在转膜前你的pvdf膜要先用甲醇浸泡几分钟再放到buffer中做夹心。没有甲醇活化的话就会出现你这种情况，不只是marker你的蛋白也转不上去。LZ是不是没有活化？？？