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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】southern blot 转膜
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】southern blot 转膜 已有7人参与

昨天做了转膜，今早剥下以后，膜拿去固定去了，胶又去染色看了下，发现还有很多没转过去，哎，是不是就意味着又失败了。之前几次转膜都没这样情况，高手指点下啊，大概什么原因。
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1楼 2011-03-12 10:18:22
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-12 18:29:22
转完膜要尽快取下来吧，转膜一个小时左右就差不多了。中间应该避免气泡产生。
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2楼2011-03-12 17:40:30
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tigertang

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
避免气泡，换纸，转》24h， 以前没少做，每一部都搞扎实，可以不用照太多同位素
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3楼2011-03-12 21:49:09
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上层滤纸和下层滤纸接触短路了吧？胶是不是太薄了？5毫米的胶？
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4楼2011-03-13 00:00:00
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
没有短路的，吸水纸也常换，转了快20小时。以前做的时候也是这么来的，都没问题，这次唯一差别是重新配试剂了，因为pH计标准出问题，昨天发现20SSCpH都6.5了，这个会有很大影响吗？虽然转的不好，但是我还是继续做了，一会就显色，祈祷下。
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5楼2011-03-13 10:58:20
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你上样量多大咯，如果你的片段较大，那么转20小时也转不干净
如果小片段，一般转8小时就可以了
总的来说胶上残留很正常，成不成功看细节操作和样品制备


上图是最新做的，因为不是用同位素，所以上样量较大～～

[ Last edited by shaquila on 2011-3-13 at 11:30 ]
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6楼2011-03-13 11:07:01
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
谢谢shaquila 的解答。
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7楼2011-03-13 11:30:44
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steler_ly
8楼2011-12-19 14:13:47
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sxx870225

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
探针浓度过大  会没有杂交条带吗
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9楼2012-10-08 14:44:14
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
引用回帖:
1366548楼: Originally posted by sxx870225 at 2012-10-08 14:44:14
探针浓度过大  会没有杂交条带吗

我有时候也会出现探针过量，但是能杂出条带，楼主不妨做一下斑点杂交预实验，如果探针和目的片段能杂出信号，和样品杂不出信号，可能是样品有问题。祝好运。
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10楼2012-10-08 15:06:17
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