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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 通过southern blot如何确定质粒的拷贝数
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lichonglx

金虫 (小有名气)

[求助] 通过southern blot如何确定质粒的拷贝数

通过southern blot如何确定质粒的拷贝数？我想看看我构建载体在宿主里的拷贝数，RT-pcr太贵了，我想请教一下做过southern blot的人能不能告诉我用此方法怎么确定质粒的拷贝数，最好附上实验方法跟方法来源。
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1楼 2011-05-11 18:47:53
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vonsun

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lichonglx(金币+2): 2011-06-01 12:12:39
做阳性对照，即用你的质粒稀释到可检测的拷贝数。
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2楼2011-05-21 00:28:53
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liukgg

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lichonglx(金币+7): 文献有点老了，southernblot似乎是确定基因组的，我自己搞错了，还是谢了 2011-06-01 12:13:45
Southern blot 是一种常用的 DNA 定量的分子生物学方法。其原理是将待测的 DNA 样品固定在固相载体（硝酸纤维膜或尼龙膜）上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号，通过检测信号的有无、强弱可以对样品定性、定量，从而计算出转入的拷贝数。
《质粒拷贝数的测定方法》这篇文献上有关于southern blot的内容，下下来看一下
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山水凤凰
3楼2011-05-21 10:54:27
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
做qPCR啊，哪有用Southern blot定量的
Southern blot也不便宜，而且不一定能做得好
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4楼2011-10-31 11:08:06
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