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nnsulei金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题 已有8人参与
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最近做WESTERN遇到了一些问题，困扰好长时间还请各位高手指点迷津。胶片压出来如下。一抗是去年稀释的 ，做了N多次 出了一两次结果，转膜：2h 350mA. 为什么重复做不出来，而作出来的结果却是这样： |
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zhixuec
木虫 (著名写手)
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- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2010-07-29 11:04:41
3楼2010-07-29 20:33:41
4楼2010-07-29 20:57:12
5楼2010-07-30 09:46:28
6楼2010-07-30 09:51:05
我做过方法摸索，楼主可以把一些相关参数上传下，帮你简单分析下
nnsulei(金币+1): 2010-08-01 10:02:14
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最好把蛋白分子量，膜用的是什么材料的多大孔径的，上传下。既然能出结果就说明楼主的抗体还是可以用的。主要应该还是转移时候出的问题。 我们的蛋白80Kd，用的硝酸纤维素膜或者PVDF膜，推荐PVDF膜本底较浅。 楼主的电流貌似太大了，极有可能转过了。电流一般用0.8-1.5mA/cm2，转移时间45min-90min，楼主这个电流太大了，时间也太长了，建议更换下电流。 转完之后楼主可以将凝胶再染下色，如果没有蛋白残留了，90%可能是转过了。膜也可以用丽春红染下色，如果有色再做，没有色就重新转，节省时间和抗体 |
7楼2010-07-30 10:04:21
8楼2010-07-30 13:05:08
9楼2012-07-09 22:26:13
10楼2013-05-21 08:27:11