| 查看: 2343 | 回复: 9 | |||
nnsulei金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题 已有8人参与
|
最近做WESTERN遇到了一些问题，困扰好长时间还请各位高手指点迷津。胶片压出来如下。一抗是去年稀释的 ，做了N多次 出了一两次结果，转膜：2h 350mA. 为什么重复做不出来，而作出来的结果却是这样： |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有212人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- western blot 请教
已经有10人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教关于western blot转印方法的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
已经有18人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
- western blot 转膜问题 期待高手解答
已经有10人回复
zhixuec
木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3328.2
- 散金: 601
- 红花: 6
- 帖子: 2564
- 在线: 191.4小时
- 虫号: 957824
- 注册: 2010-02-28
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2010-07-29 11:04:41
3楼2010-07-29 20:33:41
4楼2010-07-29 20:57:12
5楼2010-07-30 09:46:28
6楼2010-07-30 09:51:05
我做过方法摸索，楼主可以把一些相关参数上传下，帮你简单分析下
nnsulei(金币+1): 2010-08-01 10:02:14
|
最好把蛋白分子量，膜用的是什么材料的多大孔径的，上传下。既然能出结果就说明楼主的抗体还是可以用的。主要应该还是转移时候出的问题。 我们的蛋白80Kd，用的硝酸纤维素膜或者PVDF膜，推荐PVDF膜本底较浅。 楼主的电流貌似太大了，极有可能转过了。电流一般用0.8-1.5mA/cm2，转移时间45min-90min，楼主这个电流太大了，时间也太长了，建议更换下电流。 转完之后楼主可以将凝胶再染下色，如果没有蛋白残留了，90%可能是转过了。膜也可以用丽春红染下色，如果有色再做，没有色就重新转，节省时间和抗体 |
7楼2010-07-30 10:04:21
8楼2010-07-30 13:05:08
9楼2012-07-09 22:26:13
10楼2013-05-21 08:27:11
