| 查看: 2475 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
nnsulei金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题 已有8人参与
|
||
最近做WESTERN遇到了一些问题，困扰好长时间还请各位高手指点迷津。胶片压出来如下。一抗是去年稀释的 ，做了N多次 出了一两次结果，转膜：2h 350mA. 为什么重复做不出来，而作出来的结果却是这样： |
回复此楼» 猜你喜欢
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- western blot 请教
已经有10人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教关于western blot转印方法的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
已经有18人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
- western blot 转膜问题 期待高手解答
已经有10人回复
我做过方法摸索，楼主可以把一些相关参数上传下，帮你简单分析下
nnsulei(金币+1): 2010-08-01 10:02:14
|
最好把蛋白分子量，膜用的是什么材料的多大孔径的，上传下。既然能出结果就说明楼主的抗体还是可以用的。主要应该还是转移时候出的问题。 我们的蛋白80Kd，用的硝酸纤维素膜或者PVDF膜，推荐PVDF膜本底较浅。 楼主的电流貌似太大了，极有可能转过了。电流一般用0.8-1.5mA/cm2，转移时间45min-90min，楼主这个电流太大了，时间也太长了，建议更换下电流。 转完之后楼主可以将凝胶再染下色，如果没有蛋白残留了，90%可能是转过了。膜也可以用丽春红染下色，如果有色再做，没有色就重新转，节省时间和抗体 |
7楼2010-07-30 10:04:21
zhixuec
木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3328.2
- 散金: 601
- 红花: 6
- 帖子: 2564
- 在线: 191.4小时
- 虫号: 957824
- 注册: 2010-02-28
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2010-07-29 11:04:41
3楼2010-07-29 20:33:41
4楼2010-07-29 20:57:12
