原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题 - 分子生物 - 综合其他

zzjzheng

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@lxj341401

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1楼 2012-04-11 15:00:24

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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zzjzheng: 金币+5 2012-04-12 09:22:17
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦 2012-04-12 13:44:03

western blot的问题不清楚。
硫氧还蛋白融合伴侣的存在是否影响融合表达的酶的活性的问题没有统一结论，看形成高级结构的情况，硫氧还蛋白不影响目的蛋白正确折叠就不会影响蛋白的原有活性，反之则影响。做体外酶活反应时要不要去除硫氧还蛋白，还是融合蛋白够直接用于反应，我的观点是先直接用融合蛋白检测，没有活性再去除硫氧还蛋白再检测活性。

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2楼2012-04-11 20:41:23

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zzjzheng

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3楼2012-04-12 09:44:12

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imyting

至尊木虫 (正式写手)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-04-12 09:44:12:
大哥，会不会发生这样的情况，就是重组质粒表达成重组蛋白后，重组蛋白的5‘端会部分被切除，这样就造成我这样考马斯亮蓝染色表达很明显，而6*His的Western blot失败？？？

这种可能性不大，因为pet-30a在两端都有His-tag，而且你这种切除的提法也没有什么依据啊！至于测酶活时切不切的问题，你要根据自己要投的杂志来确定，自己瞎捉摸是不行的，杂志对于这些融合蛋白的处理都有自己的规定，而且是硬性指标！

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4楼2012-04-12 09:55:29

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