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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
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天山脚下

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关western-blot的一些问题 已有10人参与

分子量大小为21kd的蛋白，用厚度为1.5mm的凝胶。

做SDS-PAGE电泳时的电压也是积层胶70V，分离胶100V么？

用PVDF膜湿转的时候，比较合适的电流和时间是多少？

O(∩_∩)O~
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1楼 2010-05-26 20:30:10
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xj22667

银虫 (小有名气)
天山脚下(金币+1): 2010-05-26 20:44:22
我们实验室用的是半干转 15V 30min 希望对你有帮助
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2楼2010-05-26 20:35:32
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
天山脚下(金币+1): 2010-05-26 21:51:11
PVDF???,250mA 120min
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3楼2010-05-26 20:52:13
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jiahaitao1016

金虫 (小有名气)
★
天山脚下(金币+1): 2010-05-26 22:03:26
lstt09nk(金币+1):感谢分享经验~~ 2010-06-23 12:39:13
我做的蛋白是24KD的，用PVDF膜湿转，100V恒压，1h.没问题的！
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4楼2010-05-26 22:00:07
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)
天山脚下(金币+1): 2010-05-26 23:01:19
你的胶有点厚，我用的是0.75mm厚的，湿法转膜100V  1h，你最好查一下，要么增加电压要么转的时间长一些

[ Last edited by zhouyinggyf on 2010-5-30 at 23:14 ]
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5楼2010-05-26 22:49:14
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
我们实验室的老师说虹吸法更好呢
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6楼2010-05-26 22:50:57
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hflf

金虫 (小有名气)
★
天山脚下(金币+1): 2010-05-27 15:15:34
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-23 12:40:12
前几天刚做过western-blot，我的蛋白大小是14kd，我当时用的条件是
PVDF膜湿转,200mA 50min 结果发现marker34kd都全部转过去了，所以你那个21kd的建议用200mA 30min应该没问题的，至于做SDS-PAGE电泳 我用的是积层胶10mA，分离胶20mA,具体时间看你的条带在胶中的位置以便做下步的western-blot。
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行到水穷处，坐看云起时！
7楼2010-05-27 09:42:12
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liyong1981

金虫 (正式写手)
天山脚下(金币+1): 2010-05-27 16:21:52
给我金币，我给你说，哈哈哈～
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8楼2010-05-27 15:39:44
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liyong1981

金虫 (正式写手)
21KD。我转过26的，70分钟，200MA恒流，没有问题的·
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9楼2010-05-27 16:39:48
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mayina

铜虫 (初入文坛)
胶的大小，条带的多少都会影响。可以自己摸索，用考马斯亮蓝染色后再转，可以摸索出最适的条件   
个人认为哈
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10楼2010-06-23 11:38:24
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