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天山脚下

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】有关western-blot的一些问题已有10人参与

分子量大小为21kd的蛋白，用厚度为1.5mm的凝胶。

做SDS-PAGE电泳时的电压也是积层胶70V，分离胶100V么？

用PVDF膜湿转的时候，比较合适的电流和时间是多少？

O(∩_∩)O~

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1楼 2010-05-26 20:30:10

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hflf

金虫 (小有名气)

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★
天山脚下(金币+1): 2010-05-27 15:15:34
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-23 12:40:12

前几天刚做过western-blot，我的蛋白大小是14kd，我当时用的条件是
PVDF膜湿转,200mA 50min 结果发现marker34kd都全部转过去了，所以你那个21kd的建议用200mA 30min应该没问题的，至于做SDS-PAGE电泳我用的是积层胶10mA，分离胶20mA,具体时间看你的条带在胶中的位置以便做下步的western-blot。