应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western blot中出现的问题-求高手指点
181/2返回列表12下一页
查看: 2601  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liujie2008

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot中出现的问题-求高手指点

我做Western blot，考染的结果很好，转膜的时候用的是180mA，转了1.5h，10%脱脂奶粉TTBS封闭4h，一抗1:1500 4°过夜，TTBS洗三遍，每次5Min，二抗1:800，室温2h，TTBS洗三遍，每次5Min，TBS洗一遍5min，然后加的显色剂，怎么膜上没有条带呢？做了两次了，第一次的时候什么都没有，膜背景很干净，第二次背景很脏，明显的没有封闭好的样子，但是方法都是一样的，怎么这样呢？一点带都没有，我用的是PVDF膜，求高手指点
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
认真做好每一天
1楼 2011-05-25 00:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烂铁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是新手，帮你顶一下。
为什么你的封闭液是10%的脱脂奶粉而不是5%呢？另外显色过程是不是要避光的啊？
赞一下 回复此楼
看见你开心我会不禁微笑，想起你伤心我会暗暗心疼。
2楼2011-05-29 16:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+1): 2011-05-30 21:45:51
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-30 00:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄大牛

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+4): 2011-05-30 21:49:34
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
4楼2011-05-30 15:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转膜方法欠妥，确定放置顺序没错？另外探针制作效果可能不佳
赞一下 回复此楼
倚楼听风雨，淡看江湖路！
5楼2011-05-30 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chysx6 at 2011-05-30 00:46:25:
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间

我用的是湿转，180mA 1.5个小时，但是没有转出来
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
6楼2011-05-30 21:46:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chysx6 at 2011-05-30 00:46:25:
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间

我的目的蛋白是55KD，想用湿转法，求高手指点，稳压的话多少合适？时间多少？稳流的应该是多少啊？谢谢了啊
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
7楼2011-05-30 21:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 黄大牛 at 2011-05-30 15:53:38:
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错

半干转和湿转的方法不一样吧，我的目的蛋白是55KD，也是用22V,30min吗？顺便问一下一抗、二抗能重复使用吗？
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
8楼2011-05-30 21:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冬虫夏草1 at 2011-05-30 18:09:41:
转膜方法欠妥，确定放置顺序没错？另外探针制作效果可能不佳

顺序没有错，这个确定，不知道在转膜上怎么改进好呢？我的目的蛋白是55KD的，求高手指点迷津
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
9楼2011-05-30 21:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冬虫夏草1 at 2011-05-30 18:09:41:
转膜方法欠妥，确定放置顺序没错？另外探针制作效果可能不佳

还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
10楼2011-05-30 21:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liujie2008 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +5 Tide man 2026-08-04 8/400 2026-08-04 11:43 by everxc
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:36 by MWRYsWbJw4DE
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:26 by MWRYsWbJw4DE
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:26 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭