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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot 显影后发现条带中空，求解答。
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dream7000

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot 显影后发现条带中空，求解答。 已有4人参与

昨天做western blot ，显影后发现个奇怪的现象。
我的目的蛋白条带不错，但是内参条带却出现中空的状态。而且是刚刚显影十分钟后才出现的，之前的时间条带都好。求高手解答。多谢多谢。
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1楼 2010-12-24 09:59:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-24 16:20:15
降低内参一抗的浓度

因为中间蛋白浓度很高的地方结合了大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，周围一圈少，消耗慢
因此就出现条带曝空的情况
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-24 10:13:26
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dream7000

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-24 10:13:26:
降低内参一抗的浓度

因为中间蛋白浓度很高的地方结合了大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，周围一圈少，消耗慢
因此就出现条带曝空的情况

哦，原来是这样。。。多谢多谢~~~
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3楼2010-12-27 00:09:25
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pidou213

木虫 (正式写手)
★ ★
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silicare(金币+1):鼓励深入讨论 2011-01-10 09:44:12
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-24 10:13:26:
降低内参一抗的浓度

因为中间蛋白浓度很高的地方结合了大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，周围一圈少，消耗慢
因此就出现条带曝空的情况

“大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，”

发光液被消耗怎么理解呢？

谢谢
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见得多爱的多
4楼2011-01-10 08:54:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-10 08:54:25:



“大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，”

发光液被消耗怎么理解呢？

谢谢

发光液是酶促反应的底物
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5楼2011-01-10 09:55:26
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-10 09:55:26:


发光液是酶促反应的底物

哦，谢谢啊
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见得多爱的多
6楼2011-01-10 20:43:14
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dream7000

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-24 10:13:26:
降低内参一抗的浓度

因为中间蛋白浓度很高的地方结合了大量的一抗二抗，发光液消耗得快，很快把发光第底物消耗干净，周围一圈少，消耗慢
因此就出现条带曝空的情况

再补充询问一下，我的一抗浓度以及蛋白浓度和以前用的都相同，而且同时做的两张膜，一张就好好的，一张内侧的条带中空，除了一抗浓度还可能是什么问题呢？
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7楼2011-01-12 23:41:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dream7000 at 2011-01-12 23:41:50:


再补充询问一下，我的一抗浓度以及蛋白浓度和以前用的都相同，而且同时做的两张膜，一张就好好的，一张内侧的条带中空，除了一抗浓度还可能是什么问题呢？

影响因素太多，你知道怎么去解决就好。
把膜多洗几次再曝光就好了。
能低温的话尽量低温。
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8楼2011-01-13 00:13:00
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学业有成

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么western blot洗照片之后条带都是一连串黑的呢？
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9楼2012-08-02 14:40:55
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