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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办 已有8人参与

我做的是动物组织蛋白，定量时定的0.997，变性的时候盖子也盖紧了的，上样的时候也没有漏样，可是显影得到的β-actin就是不齐，就是不知道哪里出问题了，很郁闷啊，β-actin一眼就看出来不齐，我很悲伤。
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就这么熬着，什么时候是个头……
1楼 2011-03-11 10:51:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

didillytao

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 鼓励交流！话说您现在已经达到银虫啦，愿意的话可以点击“升级”。 2011-04-21 23:30:36
首先好像用冻的样就不太好,因为虽然在-80但是也会有讲解,还有一个我觉得煮样也很重要,不能超过5分钟,否则就算盖了盖子挥发也比较大,煮样后最好在冰上冰浴1分钟,这样蒸发的水汽会重新凝结,然后再离心,这样就不容易不齐了~~
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小鹿~~
6楼2011-03-11 16:37:17
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普通回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1): 哈哈 一样的 2011-04-23 10:56:00
呵呵，这是经常的事，换一批蛋白，重做
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木虫啦，哈哈
2楼2011-03-11 13:45:07
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2011-03-11 13:45:07:
呵呵，这是经常的事，换一批蛋白，重做

换一批就好了？不会吧，那这批的怎么办呢？
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就这么熬着，什么时候是个头……
3楼2011-03-11 14:15:59
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mafang68

金虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1): 运气很重要 2011-04-23 10:56:21
呵呵，存在-80冻着，你再做一批也不一定结果就好，WESTERN这个东西很磨人的，不定哪天做出来
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木虫啦，哈哈
4楼2011-03-11 15:04:08
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
胶染色均匀不？
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5楼2011-03-11 15:31:51
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邓娟

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2011-03-11 15:04:08:
呵呵，存在-80冻着，你再做一批也不一定结果就好，WESTERN这个东西很磨人的，不定哪天做出来

谢谢
确实很磨人，但是师兄师姐做的时候，我觉得他们都做的很好啊
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就这么熬着，什么时候是个头……
7楼2011-03-12 11:57:50
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邓娟

金虫 (小有名气)

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Originally posted by jurkat.1640 at 2011-03-11 15:31:51:
胶染色均匀不？

染色只看上面的还很均匀，但是下面一点就不是了，师兄说可能是取的肝的部位不同，我也不知道是不是
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就这么熬着，什么时候是个头……
8楼2011-03-12 11:59:10
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by didillytao at 2011-03-11 16:37:17:
首先好像用冻的样就不太好,因为虽然在-80但是也会有讲解,还有一个我觉得煮样也很重要,不能超过5分钟,否则就算盖了盖子挥发也比较大,煮样后最好在冰上冰浴1分钟,这样蒸发的水汽会重新凝结,然后再离心,这样就不容易 ...

这个确实变性的时候存在这个问题，谢谢，下次我按你的方法做。那个降解的倒是不打可能，因为我是定量了立马就做了。
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就这么熬着，什么时候是个头……
9楼2011-03-12 12:01:03
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2011-03-11 15:31:51:
胶染色均匀不？

不均匀
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就这么熬着，什么时候是个头……
10楼2011-04-20 22:51:44
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