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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办 已有8人参与

我做的是动物组织蛋白,定量时定的0.997,变性的时候盖子也盖紧了的,上样的时候也没有漏样,可是显影得到的β-actin就是不齐,就是不知道哪里出问题了,很郁闷啊,β-actin一眼就看出来不齐,我很悲伤。
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就这么熬着,什么时候是个头……
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

引用回帖:
Originally posted by didillytao at 2011-03-11 16:37:17:
首先好像用冻的样就不太好,因为虽然在-80但是也会有讲解,还有一个我觉得煮样也很重要,不能超过5分钟,否则就算盖了盖子挥发也比较大,煮样后最好在冰上冰浴1分钟,这样蒸发的水汽会重新凝结,然后再离心,这样就不容易 ...

这个确实变性的时候存在这个问题,谢谢,下次我按你的方法做。那个降解的倒是不打可能,因为我是定量了立马就做了。
就这么熬着,什么时候是个头……
9楼2011-03-12 12:01:03
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mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 哈哈 一样的 2011-04-23 10:56:00
呵呵,这是经常的事,换一批蛋白,重做
木虫啦,哈哈
2楼2011-03-11 13:45:07
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2011-03-11 13:45:07:
呵呵,这是经常的事,换一批蛋白,重做

换一批就好了?不会吧,那这批的怎么办呢?
就这么熬着,什么时候是个头……
3楼2011-03-11 14:15:59
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mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 运气很重要 2011-04-23 10:56:21
呵呵,存在-80冻着,你再做一批也不一定结果就好,WESTERN这个东西很磨人的,不定哪天做出来
木虫啦,哈哈
4楼2011-03-11 15:04:08
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