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邓娟

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[交流] 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办已有8人参与

我做的是动物组织蛋白，定量时定的0.997，变性的时候盖子也盖紧了的，上样的时候也没有漏样，可是显影得到的β-actin就是不齐，就是不知道哪里出问题了，很郁闷啊，β-actin一眼就看出来不齐，我很悲伤。

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就这么熬着，什么时候是个头……

1楼 2011-03-11 10:51:57

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邓娟

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引用回帖:

Originally posted by didillytao at 2011-03-11 16:37:17:
首先好像用冻的样就不太好,因为虽然在-80但是也会有讲解,还有一个我觉得煮样也很重要,不能超过5分钟,否则就算盖了盖子挥发也比较大,煮样后最好在冰上冰浴1分钟,这样蒸发的水汽会重新凝结,然后再离心,这样就不容易 ...

这个确实变性的时候存在这个问题，谢谢，下次我按你的方法做。那个降解的倒是不打可能，因为我是定量了立马就做了。