1楼: Originally posted by Fire0304 at 2011-08-12 22:06:32:
初次做western blot，蛋白分子量是57kD，
    第一次试验：浓缩胶4% 80V，分离胶10%，100V， PVDF膜转膜300mA 60min，丽春红染色无条带，封闭2h，一抗1:300，内参抗体1:500,4°C过夜，二抗1:2000,室温1h
     结 ...

3楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2011-08-13 09:25:34:
告诉我一抗抗体是哪个公司的？我的条件浓缩胶5%，40V，分离胶10%。70V。转膜100ma。2.5小时。封闭2h。一抗37°2小时（santa抗体）。二抗37°一小时。结果相当好。

6楼: Originally posted by w2boluo at 2011-08-13 22:09:51:
前后几次试验的page胶配制情况是否稳定？为何要不停的降低电压？
丽春红有时候不够敏感，染不出来的时候也不能确定就一定没转到膜上
丽春红能染上肯定是电泳和转膜都很不错了。
像你这种情况其实可以分别做2块 ...

7楼: Originally posted by Fire0304 at 2011-08-15 19:49:20:
我也是santa抗体，抗体放久了影响大吗，因为是师姐去年留下的，B-actin和二抗也是同时期的，昨天又做了一次，目的蛋白没显示出条带，但B-actin较好显示出。