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w2boluo

金虫 (小有名气)

MolEPI: 4
应助: 0 (幼儿园)
金币: 2006.6
红花: 1
帖子: 85
在线: 356.3小时
虫号: 1083233
注册: 2010-08-27
性别: GG
专业: 植物生殖生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI+1): Good 2011-08-14 09:09:32
Fire0304(金币+5): 有帮助，实验后来算是成功了 2011-11-09 00:01:48

引用回帖:

1楼: Originally posted by Fire0304 at 2011-08-12 22:06:32:
初次做western blot，蛋白分子量是57kD，
第一次试验：浓缩胶4% 80V，分离胶10%，100V， PVDF膜转膜300mA 60min，丽春红染色无条带，封闭2h，一抗1:300，内参抗体1:500,4°C过夜，二抗1:2000,室温1h
结 ...

前后几次试验的page胶配制情况是否稳定？为何要不停的降低电压？
丽春红有时候不够敏感，染不出来的时候也不能确定就一定没转到膜上
丽春红能染上肯定是电泳和转膜都很不错了。
像你这种情况其实可以分别做2块胶，转2块膜，分别用第一次和第二次转膜的条件来做目的片段和内参。