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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理
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pptony113

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理 已有10人参与

我知道用牛奶封闭是为了防止背景过高，但具体的原理是什么？请帮忙解释一下 谢谢
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1楼 2010-01-25 17:38:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★
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司马诸葛(金币+1): 1-26 10:59
引用回帖:
Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-01-25 19:07:40:
用脱脂乳封闭是让在亚硝酸纤维膜上没有结合样品蛋白的地方结合上蛋白，防止在与一抗作用时与杂蛋白结合，影响实验结果。

第1句和第3句完全正确，第2句错了，应该是防止一抗非特异性结合到膜上面
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3楼2010-01-25 19:14:01
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
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脱脂奶是最常用的经济配方，用这种封闭剂由于里面可能有痕量的生物素和碱性磷酸酶，可能造成背景污染而不适合生物素—亲和素的检测方法（如果用了生物素标记的Marker而且结果背景较高，分析结果也有可能是受此影响），脱脂奶也不适合碱性磷酸酶检测（AP）方法。
如果采用碱性磷酸酶检测系统，封闭剂最好用6%酪蛋白+1%聚乙烯吡咯烷酮+10mmol/L EDTA磷酸缓冲盐加热65度1小时确保碱性磷酸酶失活（可以加0.05%叠氮化钠，新鲜最好）。
但是叠氮钠(NaN3)对辣根过氮化物酶(HRP)有灭活作用，如果用HRP检测系统则封闭液不要加叠氮化钠为好。
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9楼2010-02-04 16:36:21
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普通回帖

雨中蜗牛

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+2): 1-25 19:37
用脱脂乳封闭是让在亚硝酸纤维膜上没有结合样品蛋白的地方结合上蛋白，防止在与一抗作用时与杂蛋白结合，影响实验结果。
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■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
2楼2010-01-25 18:07:40
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biowandy

木虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1): 1-26 10:59
顶3楼的，     防止一抗结合到膜上，  别忘了  一抗也是蛋白，

2楼哥们忘记了一抗就是蛋白，
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4楼2010-01-25 21:33:42
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towindflower

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-01-25 18:07:40:
用脱脂乳封闭是让在亚硝酸纤维膜上没有结合样品蛋白的地方结合上蛋白，防止在与一抗作用时与杂蛋白结合，影响实验结果。

不能同意更多～～～～～
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5楼2010-01-25 21:42:23
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pptony113

铜虫 (小有名气)
明白了 大家都很有才 谢啦
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6楼2010-01-26 09:58:12
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besbear

木虫 (职业作家)
★
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我再问下 如果我用碱性磷酸酶标记 NBT/NCIP显色 封闭如何做?如何减少背景？
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-01-25 19:14:01:



第1句和第3句完全正确，第2句错了，应该是防止一抗非特异性结合到膜上面

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不忘初心
7楼2010-01-26 22:46:37
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
封闭还是一样的，用脱脂牛奶或者BSA都可以，不会影响酶标的
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8楼2010-01-27 13:08:38
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lynni

木虫 (正式写手)
★
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貌似明白了~~
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淘喜欢的一切
10楼2010-09-17 22:36:20
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