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pptony113

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 825512
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性别: GG
专业: 植物学研究的新技术、新方

[交流] 【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理已有10人参与

我知道用牛奶封闭是为了防止背景过高，但具体的原理是什么？请帮忙解释一下谢谢

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1楼 2010-01-25 17:38:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 634.2
帖子: 111
在线: 20.1小时
虫号: 874201
注册: 2009-10-16
性别: MM
专业: 免疫生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

脱脂奶是最常用的经济配方，用这种封闭剂由于里面可能有痕量的生物素和碱性磷酸酶，可能造成背景污染而不适合生物素—亲和素的检测方法（如果用了生物素标记的Marker而且结果背景较高，分析结果也有可能是受此影响），脱脂奶也不适合碱性磷酸酶检测（AP）方法。
如果采用碱性磷酸酶检测系统，封闭剂最好用6%酪蛋白+1%聚乙烯吡咯烷酮+10mmol/L EDTA磷酸缓冲盐加热65度1小时确保碱性磷酸酶失活（可以加0.05%叠氮化钠，新鲜最好）。
但是叠氮钠(NaN3)对辣根过氮化物酶(HRP)有灭活作用，如果用HRP检测系统则封闭液不要加叠氮化钠为好。