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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wb感觉很多时候靠运气    我们最近做的都不好
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11楼2011-04-21 21:08:27
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-04-21 21:08:27:
wb感觉很多时候靠运气    我们最近做的都不好

运气？不会吧，做的好的人还是做的好的
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就这么熬着，什么时候是个头……
12楼2011-04-21 23:22:23
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 邓娟 at 2011-04-21 23:22:23:
运气？不会吧，做的好的人还是做的好的

最近我们组的片子背景很黑   系统重新换了的原因   没找好最佳状态
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13楼2011-04-22 13:24:39
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-04-22 13:24:39:
最近我们组的片子背景很黑   系统重新换了的原因   没找好最佳状态

新的抗体？
为什么要重新换系统，
原来的做的好，为什么不用原来的
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就这么熬着，什么时候是个头……
14楼2011-04-22 23:13:15
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-23 15:23:22
引用回帖:
Originally posted by 邓娟 at 2011-03-11 10:51:57:
我做的是动物组织蛋白，定量时定的0.997，变性的时候盖子也盖紧了的，上样的时候也没有漏样，可是显影得到的β-actin就是不齐，就是不知道哪里出问题了，很郁闷啊，β-actin一眼就看出来不齐，我很悲伤。

不太明白前面几位答的什么...可能我是新手的缘故吧...
β-actin不齐，你电泳时的分层胶是哪个公司的？还是自己做的？
如果是自己做的，好好练习做胶
如果是买的，你电泳的电压和时间分别是多少？
不齐的话，电压小点，跑的时间长点.
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生活是美好的
15楼2011-04-23 15:00:30
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 邓娟 at 2011-04-22 23:13:15:
新的抗体？
为什么要重新换系统，
原来的做的好，为什么不用原来的

原来的带浅    抗体太浪费了
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16楼2011-04-23 18:32:05
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0640409

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励新虫回帖交流 2011-04-23 21:57:46
不可以改变上样量来调整内参吗？
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17楼2011-04-23 20:07:14
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by nuoyaeva at 2011-04-23 15:00:30:
不太明白前面几位答的什么...可能我是新手的缘故吧...
β-actin不齐，你电泳时的分层胶是哪个公司的？还是自己做的？
如果是自己做的，好好练习做胶
如果是买的，你电泳的电压和时间分别是多少？
不齐的话 ...

不是说跑的前后不一致，是说最后得到的蛋白量不一样
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就这么熬着，什么时候是个头……
18楼2011-04-23 22:30:24
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 0640409 at 2011-04-23 20:07:14:
不可以改变上样量来调整内参吗？

是饿哦自己手法问题吧
哎很难过
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就这么熬着，什么时候是个头……
19楼2011-04-23 22:31:19
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
首先你要确定，你的实验设计选用actin做内参是否正确，用GAPDH，tublin做过了么？
其次，你可以做个对照，同时做你的样本按正常排板顺序来做一板，然后再用其他的组织蛋白，或者你样本中的一个点与你样本个数相同的同等蛋白浓度的单个样品的重复（也就是全点一个样本），这样，如果你的实验组不齐，对照组齐，那可能就是你蛋白有问题，或者内参选用不太合理，如果都不齐，那就是你的手法有问题了，按常理来说，后者应该是很齐的。
最后，我们退一步讲，内参只是用来校正你的上样量的差异的，微小的误差是允许的，毕竟内参也是人们假定的理想状态才是均一的，我看过一些文章，他们的内参也有不齐是可以发文的，这个你得自己取证了。
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20楼2011-04-24 16:11:23
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