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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

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[交流] 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办已有8人参与

我做的是动物组织蛋白，定量时定的0.997，变性的时候盖子也盖紧了的，上样的时候也没有漏样，可是显影得到的β-actin就是不齐，就是不知道哪里出问题了，很郁闷啊，β-actin一眼就看出来不齐，我很悲伤。

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就这么熬着，什么时候是个头……

1楼 2011-03-11 10:51:57

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ybh1987213

新虫 (初入文坛)

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★
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首先你要确定，你的实验设计选用actin做内参是否正确，用GAPDH，tublin做过了么？
其次，你可以做个对照，同时做你的样本按正常排板顺序来做一板，然后再用其他的组织蛋白，或者你样本中的一个点与你样本个数相同的同等蛋白浓度的单个样品的重复（也就是全点一个样本），这样，如果你的实验组不齐，对照组齐，那可能就是你蛋白有问题，或者内参选用不太合理，如果都不齐，那就是你的手法有问题了，按常理来说，后者应该是很齐的。
最后，我们退一步讲，内参只是用来校正你的上样量的差异的，微小的误差是允许的，毕竟内参也是人们假定的理想状态才是均一的，我看过一些文章，他们的内参也有不齐是可以发文的，这个你得自己取证了。