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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western blot中出现的问题-求高手指点
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liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 黄大牛 at 2011-05-30 15:53:38:
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错

还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？
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认真做好每一天
11楼2011-05-30 21:56:50
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liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chysx6 at 2011-05-30 00:46:25:
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间

还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？
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认真做好每一天
12楼2011-05-30 21:57:22
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liujie2008 at 2011-05-30 21:56:28:
还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？

可能内部有气泡造成局部短路，所以会发热。以后应该将膜铺平且赶出全部气泡！
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
13楼2011-06-01 12:12:55
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liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冬虫夏草1 at 2011-06-01 12:12:55:
可能内部有气泡造成局部短路，所以会发热。以后应该将膜铺平且赶出全部气泡！

应该不是气泡的问题，我检查好几遍，没有气泡了，是不是药品的问题
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认真做好每一天
14楼2011-06-01 13:05:05
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-06-03 18:27:14
首先要膜的预处理是否正确；第二确定转膜是膜和胶的顺序没有错；第三，我有点儿质疑楼主的转膜条件，180mA，1.5h，我们实验室的条件是50mA，转膜1h，你的时间太长电流也大，有可能蛋白穿过膜。还有，maker在转膜后怎么样？
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
15楼2011-06-02 15:16:36
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liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 396101466 at 2011-06-02 15:16:36:
首先要膜的预处理是否正确；第二确定转膜是膜和胶的顺序没有错；第三，我有点儿质疑楼主的转膜条件，180mA，1.5h，我们实验室的条件是50mA，转膜1h，你的时间太长电流也大，有可能蛋白穿过膜。还有，maker在转膜后 ...

谢谢关注，蛋白砸出来了，是用的80V，转膜2个小时，蛋白条带挺亮的
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认真做好每一天
16楼2011-06-03 09:52:30
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
515408楼: Originally posted by liujie2008 at 2011-05-30 21:56:28
还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？...

加个冰袋，外边放个盆子，里边加水！
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
17楼2012-09-20 12:31:08
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koyukichen

新虫 (初入文坛)
试试， 110v 3a 转   2h  但是  机器不一样 。 有可能不一样 。
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18楼2013-03-08 12:45:52
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