应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western blot中出现的问题-求高手指点
52/1返回列表
查看: 2828  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot中出现的问题-求高手指点

我做Western blot，考染的结果很好，转膜的时候用的是180mA，转了1.5h，10%脱脂奶粉TTBS封闭4h，一抗1:1500 4°过夜，TTBS洗三遍，每次5Min，二抗1:800，室温2h，TTBS洗三遍，每次5Min，TBS洗一遍5min，然后加的显色剂，怎么膜上没有条带呢？做了两次了，第一次的时候什么都没有，膜背景很干净，第二次背景很脏，明显的没有封闭好的样子，但是方法都是一样的，怎么这样呢？一点带都没有，我用的是PVDF膜，求高手指点
回复此楼

» 猜你喜欢
认真做好每一天
1楼 2011-05-25 00:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chysx6 at 2011-05-30 00:46:25:
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间

还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
12楼2011-05-30 21:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

烂铁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是新手，帮你顶一下。
为什么你的封闭液是10%的脱脂奶粉而不是5%呢？另外显色过程是不是要避光的啊？
赞一下 回复此楼
看见你开心我会不禁微笑，想起你伤心我会暗暗心疼。
2楼2011-05-29 16:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+1): 2011-05-30 21:45:51
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-30 00:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄大牛

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+4): 2011-05-30 21:49:34
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
4楼2011-05-30 15:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭