24小时热门版块排行榜    

查看: 2686  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot中出现的问题-求高手指点

我做Western blot,考染的结果很好,转膜的时候用的是180mA,转了1.5h,10%脱脂奶粉TTBS封闭4h,一抗1:1500 4°过夜,TTBS洗三遍,每次5Min,二抗1:800,室温2h,TTBS洗三遍,每次5Min,TBS洗一遍5min,然后加的显色剂,怎么膜上没有条带呢?做了两次了,第一次的时候什么都没有,膜背景很干净,第二次背景很脏,明显的没有封闭好的样子,但是方法都是一样的,怎么这样呢?一点带都没有,我用的是PVDF膜,求高手指点
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

认真做好每一天
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+1): 2011-05-30 21:45:51
180mA,转了1.5h???

半干转?请确认正确的操作方法及时间
3楼2011-05-30 00:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

烂铁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是新手,帮你顶一下。
为什么你的封闭液是10%的脱脂奶粉而不是5%呢?另外显色过程是不是要避光的啊?
看见你开心我会不禁微笑,想起你伤心我会暗暗心疼。
2楼2011-05-29 16:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄大牛

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+4): 2011-05-30 21:49:34
半干转: 22v 30min,10%脱脂牛奶block30min,TBST清洗,一抗1:1000一小时,TBST清洗3次,10min/次。二抗1:3000一小时,TBST清洗3次,10min/次,显色。效果不错
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
4楼2011-05-30 15:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转膜方法欠妥,确定放置顺序没错?另外探针制作效果可能不佳
倚楼听风雨,淡看江湖路!
5楼2011-05-30 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 06:21 by gy1nBQXYQJqL
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 05:13 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +4 gouxfjh 2026-08-28 4/200 2026-08-29 04:46 by alongwaytogo
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见