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liujie2008

金虫 (小有名气)

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[求助] Western blot中出现的问题-求高手指点

我做Western blot，考染的结果很好，转膜的时候用的是180mA，转了1.5h，10%脱脂奶粉TTBS封闭4h，一抗1:1500 4°过夜，TTBS洗三遍，每次5Min，二抗1:800，室温2h，TTBS洗三遍，每次5Min，TBS洗一遍5min，然后加的显色剂，怎么膜上没有条带呢？做了两次了，第一次的时候什么都没有，膜背景很干净，第二次背景很脏，明显的没有封闭好的样子，但是方法都是一样的，怎么这样呢？一点带都没有，我用的是PVDF膜，求高手指点

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认真做好每一天

1楼 2011-05-25 00:10:16

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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by liujie2008 at 2011-05-30 21:56:28:
还想问一下我今天用稳压80V转膜试了一下，一开始的半个小时还是80V，但是随着时间的延长，电压逐渐降低，最后到了56V了，等我转了2个小时后，转膜液和仪器直接特别烫，不知道应该怎么解决啊？

可能内部有气泡造成局部短路，所以会发热。以后应该将膜铺平且赶出全部气泡！