应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western blot中出现的问题-求高手指点
51/1返回列表
查看: 2824  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)

[求助] Western blot中出现的问题-求高手指点

我做Western blot，考染的结果很好，转膜的时候用的是180mA，转了1.5h，10%脱脂奶粉TTBS封闭4h，一抗1:1500 4°过夜，TTBS洗三遍，每次5Min，二抗1:800，室温2h，TTBS洗三遍，每次5Min，TBS洗一遍5min，然后加的显色剂，怎么膜上没有条带呢？做了两次了，第一次的时候什么都没有，膜背景很干净，第二次背景很脏，明显的没有封闭好的样子，但是方法都是一样的，怎么这样呢？一点带都没有，我用的是PVDF膜，求高手指点
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
认真做好每一天
1楼 2011-05-25 00:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie2008

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 黄大牛 at 2011-05-30 15:53:38:
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错

半干转和湿转的方法不一样吧，我的目的蛋白是55KD，也是用22V,30min吗？顺便问一下一抗、二抗能重复使用吗？
赞一下 回复此楼
认真做好每一天
8楼2011-05-30 21:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

烂铁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是新手，帮你顶一下。
为什么你的封闭液是10%的脱脂奶粉而不是5%呢？另外显色过程是不是要避光的啊？
赞一下 回复此楼
看见你开心我会不禁微笑，想起你伤心我会暗暗心疼。
2楼2011-05-29 16:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+1): 2011-05-30 21:45:51
180mA，转了1.5h???

半干转？请确认正确的操作方法及时间
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-30 00:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄大牛

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liujie2008(金币+4): 2011-05-30 21:49:34
半干转： 22v 30min，10%脱脂牛奶block30min，TBST清洗，一抗1：1000一小时，TBST清洗3次，10min/次。二抗1:3000一小时，TBST清洗3次，10min/次，显色。效果不错
赞一下 回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
4楼2011-05-30 15:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭