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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】southern blot 转膜 已有7人参与

昨天做了转膜,今早剥下以后,膜拿去固定去了,胶又去染色看了下,发现还有很多没转过去,哎,是不是就意味着又失败了。之前几次转膜都没这样情况,高手指点下啊,大概什么原因。
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-12 18:29:22
转完膜要尽快取下来吧,转膜一个小时左右就差不多了。中间应该避免气泡产生。
2楼2011-03-12 17:40:30
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tigertang

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
避免气泡,换纸,转》24h, 以前没少做,每一部都搞扎实,可以不用照太多同位素
3楼2011-03-12 21:49:09
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上层滤纸和下层滤纸接触短路了吧?胶是不是太薄了?5毫米的胶?
4楼2011-03-13 00:00:00
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)


没有短路的,吸水纸也常换,转了快20小时。以前做的时候也是这么来的,都没问题,这次唯一差别是重新配试剂了,因为pH计标准出问题,昨天发现20SSCpH都6.5了,这个会有很大影响吗?虽然转的不好,但是我还是继续做了,一会就显色,祈祷下。
5楼2011-03-13 10:58:20
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shaquila

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你上样量多大咯,如果你的片段较大,那么转20小时也转不干净
如果小片段,一般转8小时就可以了
总的来说胶上残留很正常,成不成功看细节操作和样品制备


上图是最新做的,因为不是用同位素,所以上样量较大~~

[ Last edited by shaquila on 2011-3-13 at 11:30 ]
6楼2011-03-13 11:07:01
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)


谢谢shaquila 的解答。
7楼2011-03-13 11:30:44
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8楼2011-12-19 14:13:47
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sxx870225

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
探针浓度过大  会没有杂交条带吗
9楼2012-10-08 14:44:14
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)


引用回帖:
1366548楼: Originally posted by sxx870225 at 2012-10-08 14:44:14
探针浓度过大  会没有杂交条带吗

我有时候也会出现探针过量,但是能杂出条带,楼主不妨做一下斑点杂交预实验,如果探针和目的片段能杂出信号,和样品杂不出信号,可能是样品有问题。祝好运。
10楼2012-10-08 15:06:17
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