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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western实验时加一抗的问题 已有10人参与

本人是新手,最近在学western blot,我要检测sirt1,p53,caspase,贝塔-actin,等好几个蛋白,那么我加一抗的时候能不能同时加入Anti-sirt1,Anti-p53,Anti-caspase,贝塔-actin等这些一抗呢?然后一起洗去一抗,一起再加上述一抗的二抗呢?
为什么我见实验室其他人都分开做,比如今天只检测Sirt1的,明天再检测贝塔-actin的,这样不是很浪费时间么?confused,求解。

[ Last edited by a83875785 on 2011-3-29 at 20:41 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-29 22:53:22
抗体之间要是有交叉反应就不行了…………
2楼2011-03-29 22:15:19
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-29 22:15:19:
抗体之间要是有交叉反应就不行了…………

那如果没有交叉的话,可以一起加ma?
3楼2011-03-31 09:32:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-03-31 09:32:27:
那如果没有交叉的话,可以一起加ma?

可以
然而,万一下次你不需要这么多蛋白同时检测,那岂不是浪费了这管稀释液?
4楼2011-03-31 09:36:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

其实分子量相差很远,就可以把膜剪开做
5楼2011-03-31 09:37:14
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-31 09:37:14:
其实分子量相差很远,就可以把膜剪开做

其实分子量相差很远,就可以把膜剪开做

_________这句话是啥意思?不懂
6楼2011-03-31 09:38:47
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

你可以同时跑几块胶啊
7楼2011-03-31 09:44:08
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

内容已删除
8楼2011-03-31 10:09:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-03-31 09:38:47:
其实分子量相差很远,就可以把膜剪开做

_________这句话是啥意思?不懂

转膜后根据分子量剪开成几块,同时分别孵抗体
9楼2011-03-31 10:24:38
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silicare

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优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
除非你的抗原抗体很特意,两分子量查的比较远,并且丰度类似,曝光出现很完美的两条带

否则抗体稀释比例不好确定,曝光程度更是不好把握,很容易失去定量功能

条件摸的很好的内参可以带上一试
10楼2011-03-31 12:46:36
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