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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】western实验时加一抗的问题
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western实验时加一抗的问题已有10人参与

本人是新手，最近在学western blot，我要检测sirt1，p53，caspase，贝塔-actin，等好几个蛋白，那么我加一抗的时候能不能同时加入Anti-sirt1，Anti-p53，Anti-caspase，贝塔-actin等这些一抗呢？然后一起洗去一抗，一起再加上述一抗的二抗呢？
为什么我见实验室其他人都分开做，比如今天只检测Sirt1的，明天再检测贝塔-actin的，这样不是很浪费时间么？confused，求解。

[ Last edited by a83875785 on 2011-3-29 at 20:41 ]
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1楼2011-03-29 20:37:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-29 22:53:22
抗体之间要是有交叉反应就不行了…………
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2楼2011-03-29 22:15:19
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-29 22:15:19:
抗体之间要是有交叉反应就不行了…………

那如果没有交叉的话，可以一起加ma?
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3楼2011-03-31 09:32:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-03-31 09:32:27:
那如果没有交叉的话，可以一起加ma?

可以
然而，万一下次你不需要这么多蛋白同时检测，那岂不是浪费了这管稀释液？
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4楼2011-03-31 09:36:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
其实分子量相差很远，就可以把膜剪开做
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5楼2011-03-31 09:37:14
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-31 09:37:14:
其实分子量相差很远，就可以把膜剪开做

其实分子量相差很远，就可以把膜剪开做

_________这句话是啥意思？不懂
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6楼2011-03-31 09:38:47
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
你可以同时跑几块胶啊
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7楼2011-03-31 09:44:08
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
内容已删除
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8楼2011-03-31 10:09:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-03-31 09:38:47:
其实分子量相差很远，就可以把膜剪开做

_________这句话是啥意思？不懂

转膜后根据分子量剪开成几块，同时分别孵抗体
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9楼2011-03-31 10:24:38
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
除非你的抗原抗体很特意，两分子量查的比较远，并且丰度类似，曝光出现很完美的两条带

否则抗体稀释比例不好确定，曝光程度更是不好把握，很容易失去定量功能

条件摸的很好的内参可以带上一试
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10楼2011-03-31 12:46:36
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