24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1818  |  回复: 15

yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】转膜 已有7人参与

大家好,我最近做180kd蛋白的westernblot,想请教下你们的转膜条件,我用的是300mA的恒流,转膜两个小时,最后显色时看见条带还可以,就是特别的淡,应该说很淡,是不是没有转膜完全呀?谢谢大家,请支招。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-07 08:25:15
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功,不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..
2楼2010-12-06 23:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2010-12-06 23:08:21:
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功,不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..

我们的蛋白分子量较小 23KD  70kD常用
3楼2010-12-06 23:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananjizhu

新虫 (初入文坛)

哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时
4楼2010-12-07 06:51:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
湿转的么?分子量太大了。
52187644
5楼2010-12-07 08:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhuijuan

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:03
引用回帖:
Originally posted by yananjizhu at 2010-12-07 06:51:52:
哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时

我们实验室一直用60mA 2h (0.8mA /cm 2     1.5h ,膜裁的是6*9,理论算0.8*54=43.2mA   1.5h即可),按说应该转移完全的,顺便说一下用的半干法转移.你们每次染色都顺利吗? 多谢
6楼2010-12-07 14:44:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananjizhu

新虫 (初入文坛)

恩 按我们的条件 可以转过去 染膜能看见t条带
7楼2010-12-07 22:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yananjizhu

新虫 (初入文坛)

就是湿转
8楼2010-12-07 22:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:57
时间太少,湿转300mA起码3个小时,或者一抗不好,其实一抗好才是真的好!
9楼2010-12-07 22:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:52:15
推荐一个prestain 蛋白marker 可以通过180kD的marker来估计你的蛋白转的效率



[ Last edited by wangleisdnu on 2010-12-8 at 04:39 ]
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
10楼2010-12-08 04:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yananjizhu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕322分 +10 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 21:22 by 学员8dgXkO
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +6 小叮当来了 2026-03-30 7/350 2026-04-05 20:30 by lys0704
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +4 李rien 2026-04-05 4/200 2026-04-05 18:01 by kk112233
[考研] 323求调剂(计算机视觉和大模型项目经历) +3 chaoxiicy 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:33 by zhq0425
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 301求调剂 +12 121. 2026-04-04 12/600 2026-04-05 09:00 by 来看流星雨10
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 085600,320分求调剂 +14 大馋小子 2026-04-04 15/750 2026-04-04 16:27 by 无际的草原
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 326求调剂 +3 9ahye 2026-04-02 4/200 2026-04-03 08:43 by Jaylen.
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 085900土木水利336分求调剂 +4 Zhangjiangj 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:40 by 1753564080
[考研] 266分,一志愿电气工程,本科材料,求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
信息提示
请填处理意见