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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转膜
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】转膜 已有7人参与

大家好，我最近做180kd蛋白的westernblot，想请教下你们的转膜条件，我用的是300mA的恒流，转膜两个小时，最后显色时看见条带还可以，就是特别的淡，应该说很淡，是不是没有转膜完全呀？谢谢大家，请支招。
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1楼 2010-12-06 21:57:33
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-07 08:25:15
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功，不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..
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2楼2010-12-06 23:08:21
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2010-12-06 23:08:21:
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功，不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..

我们的蛋白分子量较小 23KD  70kD常用
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3楼2010-12-06 23:09:29
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时
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4楼2010-12-07 06:51:52
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
湿转的么？分子量太大了。
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52187644
5楼2010-12-07 08:39:09
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:03
引用回帖:
Originally posted by yananjizhu at 2010-12-07 06:51:52:
哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时

我们实验室一直用60mA 2h (0.8mA /cm 2     1.5h ，膜裁的是6*9，理论算0.8*54=43.2mA   1.5h即可)，按说应该转移完全的，顺便说一下用的半干法转移.你们每次染色都顺利吗？ 多谢
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6楼2010-12-07 14:44:57
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
恩 按我们的条件 可以转过去 染膜能看见t条带
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7楼2010-12-07 22:37:18
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
就是湿转
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8楼2010-12-07 22:38:17
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:57
时间太少，湿转300mA起码3个小时，或者一抗不好，其实一抗好才是真的好！
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9楼2010-12-07 22:59:53
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:52:15
推荐一个prestain 蛋白marker 可以通过180kD的marker来估计你的蛋白转的效率



[ Last edited by wangleisdnu on 2010-12-8 at 04:39 ]
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
10楼2010-12-08 04:37:57
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