bigbangrex

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8766.4
帖子: 209
在线: 99.8小时
虫号: 854634

[交流] 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！

如题，我最近想做6kd，7.5kd和300kd的三个蛋白western，查阅了文献说小分子要用三甲基甘氨酸体系电泳，0.2um的膜，跑了电泳但是总是转不出来，还有那个大分子蛋白，也老是转不出来，老板怒了，急死我了。
我实验室是六一仪器厂的湿转体系，请问有没有高手指点一下两种极端蛋白的转膜时间或注意事项条件什么的，谢谢了！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有126人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

westernblot PVDF膜甲醇浸泡时间已经有14人回复
western的转膜液配方已经有6人回复
western bloting转印求教已经有16人回复
蛋白质同源模建求助！已经有6人回复
急！500kD 蛋白western 求助已经有17人回复
BDNF的转膜条件（湿转）已经有3人回复
怎么区分小分子还是大分子已经有6人回复
EGFR western蛋白两条带已经有5人回复
western目的蛋白发生漂移已经有7人回复
小分子蛋白的western blotting注意事项已经有12人回复
求助EGFP蛋白的western及免疫荧光问题！！！！！急急急！！！！！已经有4人回复
组蛋白转膜技术已经有3人回复
细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？已经有4人回复
western转膜最近总是转过，大家帮忙分析下原因哈已经有22人回复
western 转膜不均匀什么原因已经有7人回复
请教蛋白质之类的大分子模拟入门建议。。。已经有6人回复
western bloting 凝胶成像系统使用调查已经有72人回复
求助western mark 转膜不全，急！已经有7人回复
western bloting 短路的疑问已经有7人回复
求适合western bloting的提取植物组织蛋白提取方法已经有12人回复
western转膜问题已经有8人回复
求助，如何使用Forster能量转移理论计算药物小分子与蛋白之间的能量转移啊？已经有11人回复
求助Western-bot转膜问题已经有25人回复
【求助/交流】转膜已经有15人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2010-11-25 20:50:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8766.4
帖子: 209
在线: 99.8小时
虫号: 854634

求好心人，求大侠！

回复此楼

2楼2010-11-26 10:18:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 3796.5
帖子: 1693
在线: 238.6小时
虫号: 1031642

bigbangrex(金币+5): 2010-11-29 10:04:50

我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

赞一下

回复此楼

3楼2010-11-28 21:08:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8766.4
帖子: 209
在线: 99.8小时
虫号: 854634

引用回帖:

Originally posted by huangwensh at 2010-11-28 21:08:57:
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

那请问转膜液有什么不同或者胶有什么不同吗？

赞一下

回复此楼

4楼2010-11-29 10:04:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 3796.5
帖子: 1693
在线: 238.6小时
虫号: 1031642

bigbangrex(金币+1): 2011-04-26 10:22:36

转膜液里含甘氨酸，甲醇，tris,SDS，胶一般和网上大家用的都差不多的，没什么区别

赞一下

回复此楼

5楼2010-11-30 09:28:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

798250242

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1.5
帖子: 5
在线: 3.9小时
虫号: 1920254

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

355971楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-28 21:08:57
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

请问，膜的孔径，浓缩胶的浓度？

赞一下

回复此楼

6楼2013-03-28 18:53:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

798250242

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1.5
帖子: 5
在线: 3.9小时
虫号: 1920254

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

398279楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-30 09:28:32
转膜液里含甘氨酸，甲醇，tris,SDS，胶一般和网上大家用的都差不多的，没什么区别

请问，转膜液的配方，我在做一个260kb的大分子，做了几次western blotting没做出结果，我们实验室的转膜液没加sds，今天看到您的贴，想学习下你们的转膜液配法，能分享下吗？发我的邮箱也行，798250242

赞一下

回复此楼

7楼2013-03-28 18:57:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 3796.5
帖子: 1693
在线: 238.6小时
虫号: 1031642

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

1988604楼: Originally posted by 798250242 at 2013-03-28 18:57:42
请问，转膜液的配方，我在做一个260kb的大分子，做了几次western blotting没做出结果，我们实验室的转膜液没加sds，今天看到您的贴，想学习下你们的转膜液配法，能分享下吗？发我的邮箱也行，798250242...

甘氨酸2.9g，tris5.8g,SDS0.37g，配成800ml.用的时候加20%的甲醇就行了。

赞一下

回复此楼

8楼2013-03-30 08:24:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

娜小孩儿

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 7089.4
帖子: 1050
在线: 191.2小时
虫号: 1292547

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

小蛋白用半干转吧

赞一下

回复此楼

9楼2013-03-30 09:45:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

应助: 62 (初中生)
金币: 427.1
帖子: 126
在线: 72.4小时
虫号: 2251936

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

wet transfer glycine 14.4g, trisbase 3.03g add water to 800ml the add 200ml methanol. i never transfer 7.5kd protein, but i think you need short transfer time like 25min 75v, for large protein i have done 400kd, 80v 50min. very successful

赞一下

回复此楼

10楼2013-03-30 10:00:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖