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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！

如题，我最近想做6kd，7.5kd和300kd的三个蛋白western，查阅了文献说小分子要用三甲基甘氨酸体系电泳，0.2um的膜，跑了电泳但是总是转不出来，还有那个大分子蛋白，也老是转不出来，老板怒了，急死我了。
我实验室是六一仪器厂的湿转体系，请问有没有高手指点一下两种极端蛋白的转膜时间或注意事项条件什么的，谢谢了！
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1楼 2010-11-25 20:50:34
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
求好心人，求大侠！
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2楼2010-11-26 10:18:17
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huangwensh

木虫 (著名写手)
bigbangrex(金币+5): 2010-11-29 10:04:50
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转
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3楼2010-11-28 21:08:57
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangwensh at 2010-11-28 21:08:57:
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

那请问转膜液有什么不同或者胶有什么不同吗？
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4楼2010-11-29 10:04:35
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huangwensh

木虫 (著名写手)
bigbangrex(金币+1): 2011-04-26 10:22:36
转膜液里含甘氨酸，甲醇，tris,SDS，胶一般和网上大家用的都差不多的，没什么区别
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5楼2010-11-30 09:28:32
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798250242

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
355971楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-28 21:08:57
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

请问，膜的孔径，浓缩胶的浓度？
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6楼2013-03-28 18:53:01
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798250242

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
398279楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-30 09:28:32
转膜液里含甘氨酸，甲醇，tris,SDS，胶一般和网上大家用的都差不多的，没什么区别

请问，转膜液的配方，我在做一个260kb的大分子，做了几次western blotting没做出结果，我们实验室的转膜液没加sds，今天看到您的贴，想学习下你们的转膜液配法，能分享下吗？发我的邮箱也行，798250242
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7楼2013-03-28 18:57:42
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huangwensh

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1988604楼: Originally posted by 798250242 at 2013-03-28 18:57:42
请问，转膜液的配方，我在做一个260kb的大分子，做了几次western blotting没做出结果，我们实验室的转膜液没加sds，今天看到您的贴，想学习下你们的转膜液配法，能分享下吗？发我的邮箱也行，798250242...

甘氨酸2.9g，tris5.8g,SDS0.37g，配成800ml.用的时候加20%的甲醇就行了。
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8楼2013-03-30 08:24:11
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娜小孩儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小蛋白用半干转吧
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9楼2013-03-30 09:45:56
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robustli

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wet transfer glycine 14.4g, trisbase 3.03g add water to 800ml the add 200ml methanol. i never transfer 7.5kd protein, but i think you need short transfer time like 25min 75v, for large protein i have done 400kd, 80v 50min. very successful
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10楼2013-03-30 10:00:16
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美美伊

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道你后来问题解决了没？咋解决的啊？
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11楼2014-01-14 10:52:15
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