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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！

如题，我最近想做6kd，7.5kd和300kd的三个蛋白western，查阅了文献说小分子要用三甲基甘氨酸体系电泳，0.2um的膜，跑了电泳但是总是转不出来，还有那个大分子蛋白，也老是转不出来，老板怒了，急死我了。
我实验室是六一仪器厂的湿转体系，请问有没有高手指点一下两种极端蛋白的转膜时间或注意事项条件什么的，谢谢了！
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1楼2010-11-25 20:50:34
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798250242

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
355971楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-28 21:08:57
我做的是220和249的，用300mA转了3个小时，没问题，也是湿转

请问，膜的孔径，浓缩胶的浓度？
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6楼2013-03-28 18:53:01
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798250242

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
398279楼: Originally posted by huangwensh at 2010-11-30 09:28:32
转膜液里含甘氨酸，甲醇，tris,SDS，胶一般和网上大家用的都差不多的，没什么区别

请问，转膜液的配方，我在做一个260kb的大分子，做了几次western blotting没做出结果，我们实验室的转膜液没加sds，今天看到您的贴，想学习下你们的转膜液配法，能分享下吗？发我的邮箱也行，798250242
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7楼2013-03-28 18:57:42
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