应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
51/1返回列表
查看: 3333  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？

各位做过Western blotting的同仁们，本人最近要从细胞中提取蛋白做WB，通过与内参比较，看看药物对细胞内抗氧化蛋白表达量的影响，我想问一下，我提取的蛋白应该是胞内总蛋白呢，还是根据这些抗氧化蛋白在细胞中的位置来选择不同的提取试剂。每种蛋白在细胞内的位置已经找到，有的是在线粒体中，有的是在细胞质中，要是提取的话，该怎么选择试剂呢？由于是第一次接触这种情况，不是很懂，请各位帮助一下！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-04 22:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提取总蛋白就可以了吧，只需要与对照组在抗氧化蛋白相应的位置做比较就可以看出差别。分离不同细胞部位的蛋白质，操作起来难度还是比较大的。
赞一下 回复此楼
一个人的努力和坚持！
2楼2013-01-05 08:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你想提取不同细胞器中的蛋白，那就离心分离细胞器，如果是总蛋白，就加去垢剂。可溶性蛋白则不用去垢剂！
赞一下 回复此楼
shine
3楼2013-01-05 08:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:40
如果你的目的基因定位在特定的细胞器里面，分离细胞器后目的蛋白的相对浓度会提高，对研究它的功能和调控也更方便。但是如果你不知道目的蛋白的定位，先提一个总蛋白做western就可以了。所谓可溶蛋白就是用超速离心后还存在在上清里面。如果是膜蛋白的话会和膜及亚细胞结构一起沉降下来。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-05 08:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:50
你先对于你的目的蛋白质加以定位，看是在细胞的什么部位，然后在粉碎细胞时分级分离细胞成分，根据需要留下不同的细胞组分，在进行进一步分离，如果是膜蛋白则要用去垢剂或者表面活性剂，不要一次体总蛋白质，分离起来很麻烦的。
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-09 21:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 czcpudai 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:46 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +9 锦衣卫寒战 2026-07-28 13/650 2026-08-04 07:21 by Ermito
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭