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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？ 已有3人参与

本人是新手，看别人做western 的时候总是分核蛋白和总蛋白，请问什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？

另外在公司里买的是不是一抗和二抗，而检测的那些蛋白如sirt1，caspase，HDAC cyclin等 都是人体内本身就表达出来的蛋白？我的理解不知道正确吗？谢谢啦
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1楼 2011-03-26 11:26:17
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk: 很明显的是在做广告，警告下！！ 2011-03-27 12:01:23
主要是看所研究的目的蛋白质的位置，如果是在核中，可以用核蛋白提取试剂盒，如果有位于胞质中的，也有膜上的，也有核中的，可以用总蛋白提取试剂盒，上海生工就有

全蛋白提取试剂盒
Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit       
产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2～8℃。
产品特点：
1．提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性；
2．整个操作过程只需要30分钟左右；
3．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取；
4．避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性；
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
编号        包装        价格        产地
BSP003        50 Assays        520        生工

细胞核蛋白质提取试剂盒
Nucleoprotein Extraction Kit       
产品说明：本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀，EMSA，Pull Down, 转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从107个培养细胞或200mg动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2-～8℃
产品特点：
1．提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验;
2．可以从50x107个培养细胞或50x200mg动物组织提取核蛋白;
3．整个实验过程只需要45分钟左右;
4．在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染;
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
编号        包装        价格        产地
BSP009        50 Assays        300        生工
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2楼2011-03-26 17:01:54
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+3): 鼓励 可以举报 2011-03-26 20:47:13

生工男，人家不是问试剂盒的问题，不要不遗余力地推销你们家的产品好不？你自己用过吗？好用吗？不要一味地给别人推销，自己没有亲身用过就请那啥~~~

总蛋白意思就是一个细胞所有的蛋白，包括膜蛋白、胞浆蛋白（细胞质和细胞器的）以及核蛋白
核蛋白就是细胞核含有的蛋白

一般情况下，都以总蛋白为基础就好了
但是如果你想了解某个蛋白是否发生了诸如入核出核的状态，那么就需要分别提取核蛋白和胞浆来检测，因为总蛋白量是不会变的，变的只是位置


做WB，去公司买的是针对那些蛋白的抗体，一般都会写成anti-xxxx

sirt1，caspase，HDAC cyclin，你提到的这些都是你要检测的样本中本身含有的蛋白
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3楼2011-03-26 17:19:48
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天: 不过的确有广告嫌疑 2011-03-26 20:47:37
我们没有用过会卖吧？注意你的言行！！！！！
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4楼2011-03-26 19:29:10
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk: 生物版禁止打广告！！ 2011-03-27 11:59:15
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-26 17:19:48:

生工男，人家不是问试剂盒的问题，不要不遗余力地推销你们家的产品好不？你自己用过吗？好用吗？不要一味地给别人推销，自己没有亲身用过就请那啥~~~

总蛋白意思就是一个细胞所有的蛋白，包括膜蛋白、 ...

我们没有用过会卖吧？注意你的言行！！！！！ 不要以此为乐
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5楼2011-03-27 10:50:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 我们鼓励回帖，但是坚决反对或者禁止以回帖的形式打广告，感谢提示~~ 2011-03-27 12:00:16
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2011-03-27 10:50:45:
我们没有用过会卖吧？注意你的言行！！！！！ 不要以此为乐

也请注意你的言行，不要以到处sale你们的产品为乐。印象中生物版从来不鼓励广告，而且，你说的是“我们”，请问你自己亲自用过吗？还是听谁说的？
这是有本质的不同的。
对上海生工没有恶意，毕竟是本土算是做得不错的公司，但你这种推销策略只会招来反感。
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6楼2011-03-27 11:05:25
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付希安

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-27 11:05:25
也请注意你的言行，不要以到处sale你们的产品为乐。印象中生物版从来不鼓励广告，而且，你说的是“我们”，请问你自己亲自用过吗？还是听谁说的？
这是有本质的不同的。
对上海生工没有恶意，毕竟是本土算是做得 ...

您好，我现在是做了两次western,用的是碧云天的核蛋白提取试剂盒，第一次核蛋白杂带多，第二次降低抗体浓度，没有条带了，怎么办？

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7楼2017-04-06 21:15:05
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
没想到6年后老帖被挖出来

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8楼2017-04-06 21:21:20
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