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a83875785铁杆木虫 (著名写手)
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【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题已有11人参与
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| 被告知核蛋白内参Histone和总蛋白内参贝塔-actin分别是用于核蛋白的蛋白衡量和总蛋白的蛋白衡量，但是我不知道为什么要这样，那么如果用Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样？谢谢了 |
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3楼2011-04-14 11:50:19
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取，不提取总蛋白，所以做内参要选择相应部位表达稳定的蛋白。beta-actin在胞浆中表达高效稳定，而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白，所以beta-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达beta-actin，所以不能用于核蛋白内参。同理，细胞核内的蛋白用于做总蛋白的内参，自然也不合理，内参自当选择与目的蛋白表达部位相同的蛋白才有说服力。 实际情况中，无论什么试剂盒，都不可能完全将胞浆、胞核蛋白完全分离开，提取时总会有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定会有beta-actin，而胞浆蛋白也会有核蛋白的存在，所以你用两种蛋白做内参都能有结果，只是有的科学合理，有的不科学，没有说服力。 |
4楼2011-04-14 16:30:01
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b-actin是胞浆表达，Histone是胞核表达。细胞蛋白主要是在胞浆，所以b-actin的量要比Histone大的多。 用b-actin还是Histone做内参，主要看你提取的是总蛋白还是核蛋白。如果提的是总蛋白，必须用b-actin，提的是胞核蛋白，必须用Histone，如果你提取的是总蛋白，但用了Histone，结果可能是做不出来或者条带很弱（Histone相对于总蛋白来说太少）。而如果提取的是核蛋白，用b-actin做内参，结果则可能是做不出来（核内没有表达），或者内参条带不均匀（混入少量胞浆蛋白） 一般来说，如果你的目的蛋白在胞浆表达，那当然毋庸置疑，提取总蛋白，用b-actin，但如果在核表达，可以提总蛋白，也可以提核蛋白。但有些核蛋白的表达量比较低，提总蛋白可能就太稀了，所以要专门提取核蛋白。 |
9楼2013-01-16 13:30:15
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各位看应该选择谁做内参呢？10楼2014-11-29 23:09:33