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a83875785铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题已有11人参与
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| 被告知核蛋白内参Histone和总蛋白内参贝塔-actin分别是用于核蛋白的蛋白衡量和总蛋白的蛋白衡量，但是我不知道为什么要这样，那么如果用Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样？谢谢了 |
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b-actin是胞浆表达，Histone是胞核表达。细胞蛋白主要是在胞浆，所以b-actin的量要比Histone大的多。 用b-actin还是Histone做内参，主要看你提取的是总蛋白还是核蛋白。如果提的是总蛋白，必须用b-actin，提的是胞核蛋白，必须用Histone，如果你提取的是总蛋白，但用了Histone，结果可能是做不出来或者条带很弱（Histone相对于总蛋白来说太少）。而如果提取的是核蛋白，用b-actin做内参，结果则可能是做不出来（核内没有表达），或者内参条带不均匀（混入少量胞浆蛋白） 一般来说，如果你的目的蛋白在胞浆表达，那当然毋庸置疑，提取总蛋白，用b-actin，但如果在核表达，可以提总蛋白，也可以提核蛋白。但有些核蛋白的表达量比较低，提总蛋白可能就太稀了，所以要专门提取核蛋白。 |
9楼2013-01-16 13:30:15