| 查看: 5250 | 回复: 12 | |||
| 本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
a83875785铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题 已有11人参与
|
||
| 被告知核蛋白内参Histone和总蛋白内参贝塔-actin分别是用于核蛋白的蛋白衡量和总蛋白的蛋白衡量，但是我不知道为什么要这样，那么如果用Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样？谢谢了 |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有123人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有13人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有16人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有13人回复
-
为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？
已经有5人回复
-
今天放榜没戏了吧
已经有5人回复
-
今天放榜吗？
已经有15人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有12人回复
-
2027广东省杰青
已经有10人回复
-
朋友圈看到的
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 半定量PCR内参
已经有3人回复
- 求助！！！WB内参、抗体的问题。
已经有6人回复
- 求助关于WB的内参问题
已经有3人回复
- WB检测蛋白表达量时关于上样量的问题？
已经有16人回复
- 血清蛋白western上样内参
已经有9人回复
- 半定量 内参条带不一致
已经有4人回复
- western blot 内参β-actin图片异常
已经有11人回复
- 关于WB曝光时发现的问题
已经有4人回复
- wb植物内参抗体选择
已经有3人回复
- WB的蛋白总量，变还是不变！？
已经有6人回复
- WB曝光后，请教下图片出现此问题的原因
已经有7人回复
- 核蛋白western内参
已经有6人回复
- WB三明治--滤纸大小问题
已经有18人回复
- 在做WB，想知道大概一般提取的蛋白浓度是多少？
已经有4人回复
- WB实验，胶片问题
已经有10人回复
- 【资料】植物总蛋白提取方法
已经有80人回复
- 生工核蛋白提取试剂盒中bufferB粘稠的问题
已经有9人回复
- 双向蛋白提取，有没有提出的总蛋白，是干粉状的直接可以跑双向的
已经有7人回复
- WB 有内参 么有目得。why ?
已经有4人回复
- 提取的蛋白不稳定！！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？
已经有7人回复
- 【求助/交流】核蛋白的提取，有谁知道具体方案？
已经有6人回复
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
b-actin是胞浆表达，Histone是胞核表达。细胞蛋白主要是在胞浆，所以b-actin的量要比Histone大的多。 用b-actin还是Histone做内参，主要看你提取的是总蛋白还是核蛋白。如果提的是总蛋白，必须用b-actin，提的是胞核蛋白，必须用Histone，如果你提取的是总蛋白，但用了Histone，结果可能是做不出来或者条带很弱（Histone相对于总蛋白来说太少）。而如果提取的是核蛋白，用b-actin做内参，结果则可能是做不出来（核内没有表达），或者内参条带不均匀（混入少量胞浆蛋白） 一般来说，如果你的目的蛋白在胞浆表达，那当然毋庸置疑，提取总蛋白，用b-actin，但如果在核表达，可以提总蛋白，也可以提核蛋白。但有些核蛋白的表达量比较低，提总蛋白可能就太稀了，所以要专门提取核蛋白。 |
9楼2013-01-16 13:30:15
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2011-04-13 21:46:47
reasonspare
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 10
- 应助: 0 (幼儿园)
- 贵宾: 0.894
- 金币: 2137.1
- 红花: 11
- 帖子: 1909
- 在线: 72.5小时
- 虫号: 180928
- 注册: 2006-02-10
- 专业: All in one
3楼2011-04-14 11:50:19
314300420
捐助贵宾 (著名写手)
- BioEPI: 3
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 2193.1
- 散金: 2458
- 红花: 17
- 帖子: 1447
- 在线: 511.5小时
- 虫号: 851254
- 注册: 2009-09-18
- 性别: GG
- 专业: 抗体工程学
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+3): 谢谢分享 2011-04-16 11:06:28
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+3): 谢谢分享 2011-04-16 11:06:28
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
|
有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取，不提取总蛋白，所以做内参要选择相应部位表达稳定的蛋白。beta-actin在胞浆中表达高效稳定，而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白，所以beta-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达beta-actin，所以不能用于核蛋白内参。同理，细胞核内的蛋白用于做总蛋白的内参，自然也不合理，内参自当选择与目的蛋白表达部位相同的蛋白才有说服力。 实际情况中，无论什么试剂盒，都不可能完全将胞浆、胞核蛋白完全分离开，提取时总会有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定会有beta-actin，而胞浆蛋白也会有核蛋白的存在，所以你用两种蛋白做内参都能有结果，只是有的科学合理，有的不科学，没有说服力。 |
4楼2011-04-14 16:30:01
