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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】WB中，核蛋白内参和总蛋白内参的问题
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reasonspare

木虫 (著名写手)
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lstt09nk(金币+5): 欢迎回归^_^ 2011-04-16 19:15:39
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:56:22
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-04-13 21:37:06:
被告知核蛋白内参Histone和总蛋白内参贝塔-actin分别是用于核蛋白的蛋白衡量和总蛋白的蛋白衡量，但是我不知道为什么要这样，那么如果用Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样 ...

Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？
或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样？

我不知道你为什么这么想问题。也不知道你为什么有这种疑问？

组蛋白是和DNA等核酸组合在一起形成核蛋白，换句话，核蛋白组成成分是组蛋白，也非常保守，不会因为受到处理而减少。所以用于作为内参。

B-actin，至于为什么作为总蛋白的内参，我不想过多解释。


但是如你所说，如果反过来，肯定不行。
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3楼2011-04-14 11:50:19
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+3): 谢谢分享 2011-04-16 11:06:28
silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-04-13 21:37:06:
被告知核蛋白内参Histone和总蛋白内参贝塔-actin分别是用于核蛋白的蛋白衡量和总蛋白的蛋白衡量，但是我不知道为什么要这样，那么如果用Histone用于总蛋白的蛋白定量会怎么样？或者actin用于核蛋白的衡量会怎么样 ...

有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取，不提取总蛋白，所以做内参要选择相应部位表达稳定的蛋白。beta-actin在胞浆中表达高效稳定，而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白，所以beta-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达beta-actin，所以不能用于核蛋白内参。同理，细胞核内的蛋白用于做总蛋白的内参，自然也不合理，内参自当选择与目的蛋白表达部位相同的蛋白才有说服力。
实际情况中，无论什么试剂盒，都不可能完全将胞浆、胞核蛋白完全分离开，提取时总会有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定会有beta-actin，而胞浆蛋白也会有核蛋白的存在，所以你用两种蛋白做内参都能有结果，只是有的科学合理，有的不科学，没有说服力。
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4楼2011-04-14 16:30:01
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