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Hzhenping

新虫 (小有名气)

[求助] 求助!!!WB内参、抗体的问题。 已有1人参与

各位虫友,本人是WB新手。
我们课题组,没有谁做过WB的,之前有一个成员做过,然后就由他请购了试剂,后来他离开了,这个实验就我们自己摸索了。。。但是至今为止我们仍没成功做出内参GAPDH的条带来。目的蛋白条带可以出来,我怀疑是抗体结合不上,我们的一抗是rabbit anti rat的,二抗是goat anti rabbit,内参GAPDH是兔抗小鼠(GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin)。这样是否会结合不上?请高手指点!如果真结合不上,我该怎么办?
万分感谢!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:44:54
Hzhenping: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-01-07 23:39:45
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子,抗体本身是鼠源的单抗,所以二抗应该选抗鼠的,如山羊抗鼠。
2楼2014-01-07 01:03:06
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Hzhenping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子,抗体本身是鼠源的单抗,所以二抗应该选抗鼠的,如 ...

谢谢您的回复!
3楼2014-01-07 23:40:15
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Hzhenping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 01:03:06
内参二抗用的不对。
GAPDH is a mouse monoclonal antibody raised against GAPDH from muscle of rabbit origin
这句话的意思是做抗体用的抗原GADPH是来自兔子,抗体本身是鼠源的单抗,所以二抗应该选抗鼠的,如 ...

我还想问一下,如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗?
4楼2014-01-07 23:51:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-07 23:51:54
我还想问一下,如果内参和目的蛋白都用相同的二抗可以吗?...

二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗?你应该用抗兔的二抗。
5楼2014-01-08 01:41:12
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Hzhenping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-08 01:41:12
二抗的选择要根据一抗的来源。你的目的蛋白的一抗不是兔源的吗?你应该用抗兔的二抗。...

嗯嗯,谢谢!我们准备换一个内参试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-01-09 22:25:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Hzhenping at 2014-01-09 22:25:31
嗯嗯,谢谢!我们准备换一个内参试试。
...

其实二抗不同也没有什么。可以用检测过目的蛋白的膜直接孵育内参的一抗。因为二抗不同而不会有交叉反应。
7楼2014-01-10 01:56:43
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