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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[求助] WB抗体孵育问题！

问一下大家，在做Western Blot孵育一抗时，大家都是用脱脂奶粉稀释抗体的吗？用脱脂奶粉稀释的原因是什么啊
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1楼2011-08-23 13:51:36
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-23 13:56:29
chunmeiyang(金币+1): 2011-08-27 08:45:29
抗体说明书上都有说明，大部分使用5%的BSA稀释的。当然用专门的一抗稀释液更好，用一抗稀释液可以重复使用。
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2楼2011-08-23 13:54:08
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hgq115

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-23 17:03:03
chunmeiyang(金币+1): 2011-08-27 08:45:45
抗体稀释一般不用脱脂奶粉吧，用BSA好点，我们都在封闭的时候用脱脂奶粉。
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3楼2011-08-23 14:21:42
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hf2016

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 是的 2011-08-24 13:20:45
chunmeiyang(金币+1): 2011-08-27 08:46:00
脱脂奶粉的目的主要是为了封闭膜上的非特异性蛋白结合位点，防止一抗、二抗的非特异性反应，
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一切开始于结束之后
4楼2011-08-24 12:54:37
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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帖子真精彩!
已经收录到淘贴专辑《Western Blot》
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5楼2011-08-30 14:51:52
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
通常奶粉要好于BSA，但一抗的稀释没有永恒的好，需要试

可以参考一下pierce的网站做过的对比实验，虽然他们的目的是广告
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6楼2011-08-30 14:54:20
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hgq115 at 2011-08-23 14:21:42
抗体稀释一般不用脱脂奶粉吧，用BSA好点，我们都在封闭的时候用脱脂奶粉。

一抗使用 TBST  稀释，  封闭液使用BSA ，，二抗 也是 TBST 稀释，，这样可以吗？
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12
7楼2014-04-12 19:26:34
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ALICEzz

新虫 (初入文坛)
我们一抗稀释用的是beyotime的一抗稀释液，二抗是用脱脂奶粉稀释的。
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8楼2014-04-17 11:22:44
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