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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于一抗二抗杂交
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于一抗二抗杂交

鉴于实验室设备较差，老板认为一抗二抗孵育的时候不用摇床，也就是说是静置杂交，就可以，但是我心里很没有底，所以想请教高手。可否？？

真是悲催的人生啊 实验室设备让我想哭
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
1楼 2011-05-12 17:01:10
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-05-12 19:01:16
zcqcau(金币+2): 谢谢 2011-05-13 08:30:23
可以不用摇床，但你得先将抗体混匀了。我做WB孵育一抗就是先将抗体混匀，然后放4℃过夜，不用摇。
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2楼2011-05-12 17:47:22
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-12 20:09:00
那就静置咯
一抗是可以加上后4度静置过夜的
然后洗去非特异性结合的一抗
然后就可以选择啦：
1.PBS中浸泡组织或细胞至下午，上二抗，然后二抗过夜
2.白天上二抗，25度下静置1.5-2小时
本来我们是在25度下0.5-1小时的，但是要静置的话可能需要时间要长点，给你加到1.5-2小时，应该是能充分反应的，你摸索一下试试，要是不够就再长点时间，要是过头了，就减点时间；
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
3楼2011-05-12 19:56:28
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-05-12 17:47:22:
可以不用摇床，但你得先将抗体混匀了。我做WB孵育一抗就是先将抗体混匀，然后放4℃过夜，不用摇。

一抗和二抗的孵育时间比较长的话会有什么问题？
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4楼2011-05-13 08:31:08
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-12 19:56:28:
那就静置咯
一抗是可以加上后4度静置过夜的
然后洗去非特异性结合的一抗
然后就可以选择啦：
1.PBS中浸泡组织或细胞至下午，上二抗，然后二抗过夜
2.白天上二抗，25度下静置1.5-2小时
本来我们是在25度下0. ...

一抗和二抗的孵育时间比较长的话会有什么问题？

譬如5-6甚至8-9个小时
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5楼2011-05-13 08:31:38
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-05-13 09:17:02
zcqcau(金币+2): XX 2011-05-14 07:43:23
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2011-05-13 08:31:38:
一抗和二抗的孵育时间比较长的话会有什么问题？

譬如5-6甚至8-9个小时

引起非特异性染色较高
就是背景太深
容易引起假阳性结果与阳性结果的不好区分
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
6楼2011-05-13 08:55:03
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎分享经验。 2011-05-13 17:49:17
zcqcau(金币+1): XX 2011-05-14 07:43:30
4度静置 过夜 是经常的操作

不要郁闷 蛋白没那么金贵的

实在不放心 你就过一会去摇晃一下

希望你实验顺利
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
7楼2011-05-13 17:29:51
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 如来神掌 at 2011-05-13 17:29:51:
4度静置 过夜 是经常的操作

不要郁闷 蛋白没那么金贵的

实在不放心 你就过一会去摇晃一下

希望你实验顺利

请问一抗和二抗能二次使用吗？效果如何？如何存储才可以？
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8楼2011-05-15 08:34:35
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-05-13 08:55:03:
引起非特异性染色较高
就是背景太深
容易引起假阳性结果与阳性结果的不好区分

请问一抗和二抗能二次使用吗？效果如何？如何存储才可以？
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9楼2011-05-15 08:34:46
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-05-15 09:44:11
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2011-05-15 08:34:46:
请问一抗和二抗能二次使用吗？效果如何？如何存储才可以？

如果是做WB
可以二次使用
短期就储存在4度就可以了
时间长了最好就别用了
要是做免疫组化或者免疫荧光的话
最好是别二次使用了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
10楼2011-05-15 08:53:29
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