应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么考马斯亮蓝染色能看到我要的条带，weston却看不到呢？
181/2返回列表12下一页
查看: 2858  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小新3858

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么考马斯亮蓝染色能看到我要的条带，weston却看不到呢？

RT，我每次做电泳都是做两块，一块考马斯亮蓝染色，一块做weston，每次都是考染有条带，weston却看不到，，我做weston做的不多，大侠们帮忙分析一下原因
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-22 09:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 很热心 2011-06-22 17:23:24
考染没问题只能说明跑胶的步骤应该是没问题的，但western（楼主拼错啦）做不出来就有很多可能了：
转膜步骤：滤纸、胶、膜顺序有没有放错？
               气泡有没有赶干净？
               电极有没有插反？
               电转液有没有配错？
免疫反应：抗体有没有问题？确定可以和你的目的蛋白结合么？
               显色液有没有配错啊？
可能存在的问题要楼主小心求证了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-22 10:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小新3858(金币+2): 2011-06-22 12:29:52
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-06-22 17:23:10
引用回帖:
Originally posted by 小新3858 at 2011-06-22 09:08:20:
RT，我每次做电泳都是做两块，一块考马斯亮蓝染色，一块做weston，每次都是考染有条带，weston却看不到，，我做weston做的不多，大侠们帮忙分析一下原因

说的有些不清楚哦
1.跑胶也是western的一部分哦，你的意思是说胶用考染，转膜后再染就看不到了吧。
2.转膜后是用丽春红染，你是用什么染的那？
3.看不到东西，首先确定你转膜是否成功，有没有蛋白转上去或者是转过去了。
如果能说的具体些，就更容易分析问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-22 09:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-06-22 09:25:15:
说的有些不清楚哦
1.跑胶也是western的一部分哦，你的意思是说胶用考染，转膜后再染就看不到了吧。
2.转膜后是用丽春红染，你是用什么染的那？
3.看不到东西，首先确定你转膜是否成功，有没有蛋白转上去或者 ...

是这样的我每次做两个同样的SDS-PAGE，就是上一样的样品，SDS-PAGE跑完之后，一块用考马斯亮蓝染上，另一块就转膜，然后第二天考马斯亮蓝染色的进行脱色，另一个转到膜上的加一抗二抗进行显影
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-22 10:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didillytao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-06-22 17:23:37
如果你能确定染出来的条带是你要的话,那么应该是western的转膜,一抗,二抗,ecl中某个出了问题.不知道你们是不是湿转,膜在半干的状态下也能看到蛋白条带,你可以看一看确定有没有蛋白转到膜上,还有就是一抗和二抗的验证,二抗直接滴在膜上加ECL显色就可以验证好不好用,效价怎么样,而一抗的话以前用过吗?显色是没问题的吗?有没有过期之类的,而且ECL底物发光时间是有时限的,有些比较灵敏的ECL发光时间很短,如果动作慢可能荧光就会猝灭了,我觉得原因很多,楼主看一看哪项更有可能,希望能帮到你~~
赞一下(1人) 回复此楼
小鹿~~
5楼2011-06-22 10:16:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

忘记讲了，有些步骤，可以的话，设立control组，可能更容易找出问题哦
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-22 10:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-06-22 10:16:29:
考染没问题只能说明跑胶的步骤应该是没问题的，但western（楼主拼错啦）做不出来就有很多可能了：
转膜步骤：滤纸、胶、膜顺序有没有放错？
               气泡有没有赶干净？
               电极有没有插 ...

谢谢
金币暂时无法发放，已联系管理员
赞一下 回复此楼
7楼2011-06-22 14:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小新3858

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by didillytao at 2011-06-22 10:16:36:
如果你能确定染出来的条带是你要的话,那么应该是western的转膜,一抗,二抗,ecl中某个出了问题.不知道你们是不是湿转,膜在半干的状态下也能看到蛋白条带,你可以看一看确定有没有蛋白转到膜上,还有就是一抗和二抗的验 ...

谢谢
金币暂时无法发放，已联系管理员
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-22 14:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小新3858 at 2011-06-22 10:02:43:
是这样的我每次做两个同样的SDS-PAGE，就是上一样的样品，SDS-PAGE跑完之后，一块用考马斯亮蓝染上，另一块就转膜，然后第二天考马斯亮蓝染色的进行脱色，另一个转到膜上的加一抗二抗进行显影

转膜的时间可能没有掌握好哦，还得再摸索下，还有转膜液中是否存在SDS，也是很有影响的。
赞一下 回复此楼
9楼2011-06-23 09:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)
考染看到的是所有蛋白，WB检测的是你的目的蛋白，有时候size一样却不是你要的蛋白是很正常的哦。另外你没必要做两张膜，做WB之前或者之后都可以用立春红去染色的，是可逆的，不影响WB效果。
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
10楼2011-06-23 10:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小新3858 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 什么时候开奖？ +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭