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sean-u

金虫 (小有名气)

[求助] 关于DAB染色的请教！

请问我染水稻叶片的过氧化氢，查文献得到是DAB固体溶于10mM的MES，请问这个MES是什么？并且在抽真空的时候，水稻叶片怎样才能沉下去（我要染的水稻叶片比较长，大概4,5cm）？谢谢！
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人生就是不停的战斗！
1楼 2012-02-15 15:53:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
sean-u(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-16 12:37:49
jhu132llh(金币+3, APEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-02-19 10:47:55
MES即2-（N-吗啉代）乙磺酸，MES缓冲液是一种常见生物缓冲剂，pKa位于中性范围且不受温度变化的影响，不易螯合盐离子，在可见光和紫外光波段没有明显光吸收。配置方法为称取MES，溶于蒸馏水，根据需要使用氢氧化钠调pH（DAB记得是调到6，楼主最好根据文献确认一下）。配置好的MES缓冲液4度保存。如有需要，过滤灭菌。
另外，DAB法测植物过氧化氢，DAB不一定要溶于MES，我以前实验中使用0.1 mg/ml DAB，溶于50 mmol/l Tris-醋酸缓冲液，pH 5.0。
另外，抽真空楼主可以试试使用注射器。将植物材料置于大注射器中，吸入DAB溶液，堵住针头，使劲拉就可以了。
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2楼2012-02-15 23:13:24
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普通回帖

sean-u

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by starseacow at 2012-02-15 23:13:24:
MES即2-（N-吗啉代）乙磺酸，MES缓冲液是一种常见生物缓冲剂，pKa位于中性范围且不受温度变化的影响，不易螯合盐离子，在可见光和紫外光波段没有明显光吸收。配置方法为称取MES，溶于蒸馏水，根据需要使用氢氧化钠 ...

我现在是用磷酸缓冲液配的，结果与不加DAB的差别不大，原因可能也是没有渗进去，我只离了下心。我会试试您的抽真空方法的，谢谢。
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人生就是不停的战斗！
3楼2012-02-16 12:45:56
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lihui_2004

金虫 (小有名气)
jhu132llh(金币+2): 鼓励新虫积极应助！ 2012-02-19 10:48:04
如果只看染色的话，有一种方法是在取样点8小时前，将叶段截口插在DAB缓冲液中，到取样点的时候进行下个步骤的处理就可以了，不知道你的可不可以用。
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Dream what you want to dream, go where you want to go, be what you want to be.
4楼2012-02-17 17:28:31
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wansanlian

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihui_2004 at 2012-02-17 17:28:31:
如果只看染色的话，有一种方法是在取样点8小时前，将叶段截口插在DAB缓冲液中，到取样点的时候进行下个步骤的处理就可以了，不知道你的可不可以用。

你这种是怎么操作的啊？怎么会染到色呢？
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乱花渐欲迷人眼
5楼2012-03-19 22:37:27
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wansanlian

金虫 (小有名气)
★ ★
SongQ5285: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-26 11:18:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-02-15 23:13:24:
MES即2-（N-吗啉代）乙磺酸，MES缓冲液是一种常见生物缓冲剂，pKa位于中性范围且不受温度变化的影响，不易螯合盐离子，在可见光和紫外光波段没有明显光吸收。配置方法为称取MES，溶于蒸馏水，根据需要使用氢氧化钠 ...

以前参照别人的方法，直接用水来溶ＤＡＢ，可是发现几乎都没有什么反应，出现这个结果是不是因为没有用ＭＥＳ缓冲液溶的缘故啊？我只是想染色来看的，不进行定量的处理
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乱花渐欲迷人眼
6楼2012-03-19 22:39:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
SongQ5285: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-26 11:19:13
引用回帖:
6楼: Originally posted by wansanlian at 2012-03-19 22:39:16:
以前参照别人的方法，直接用水来溶ＤＡＢ，可是发现几乎都没有什么反应，出现这个结果是不是因为没有用ＭＥＳ缓冲液溶的缘故啊？我只是想染色来看的，不进行定量的处理

我没有直接用水直接溶DAB。不过我估计不是缓冲液的问题，你怎么处理让DAB进入植物里？
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7楼2012-03-19 23:08:12
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
SongQ5285: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-26 11:19:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by wansanlian at 2012-03-19 22:37:27:
你这种是怎么操作的啊？怎么会染到色呢？

这种方法是利用植物本身对水的运输将DAB吸入组织里
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8楼2012-03-19 23:09:21
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wansanlian

金虫 (小有名气)
★
SongQ5285: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-26 11:19:35
引用回帖:
8楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-19 23:09:21:
这种方法是利用植物本身对水的运输将DAB吸入组织里

那样的话,8个小时确定是会进去的吗
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乱花渐欲迷人眼
9楼2012-03-26 09:53:01
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