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shangyufang

木虫 (小有名气)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 3143.4
帖子: 251
在线: 140.3小时
虫号: 1127979

[交流] 请教芽孢杆菌的染色方法

如题，请教高手有关芽孢杆菌的染色方法，如选用的染色试剂（含浓度）种类，使用先后顺序及有关的注意事项等。本人是跨专业背景，请微生物专业的高人指点一下哈，谢过谢过！

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1楼 2011-06-01 17:47:34

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springTT

金虫 (正式写手)

MicEPI: 1
应助: 2 (幼儿园)
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在线: 36.3小时
虫号: 1050320

★ ★ ★ ★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-01 21:00:12

最常用的革兰氏染色法。芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
　　1）涂片固定。
　　2）草酸铵结晶紫染1分钟。
　　3）自来水冲洗。
　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
　　5）水洗，用吸水纸吸去水分。
　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
希望对你有参考价值

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2楼2011-06-01 19:55:51

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zhang860215

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1469.8
帖子: 388
在线: 407.4小时
虫号: 1212656

★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47

上面的革兰氏染色主要是针对细胞体的，要想看到芽孢必需得芽孢染色以下为两种方法：
　方法1、　　（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。　　（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。　　（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。　　（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。　　（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。　　（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。　　注意　　（1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。　　（2）加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。　　
方法2、　　（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。　　（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。　　（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。　　（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。　　（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。

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3楼2011-06-01 21:31:48

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