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shangyufang木虫 (小有名气)
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[交流]
请教芽孢杆菌的染色方法
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| 如题，请教高手有关芽孢杆菌的染色方法，如选用的染色试剂（含浓度）种类，使用先后顺序及有关的注意事项等。本人是跨专业背景，请微生物专业的高人指点一下哈，谢过谢过！ |
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5楼2011-06-02 14:54:42
2楼2011-06-01 19:55:51
zhang860215
金虫 (正式写手)
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shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
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上面的革兰氏染色主要是针对细胞体的，要想看到芽孢必需得芽孢染色以下为两种方法： 方法1、 （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 注意 （1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。 （2）加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。 方法2、 （1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 （2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。 （3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。 （4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。 （5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。 |
3楼2011-06-01 21:31:48
小嫩瓜
木虫 (小有名气)
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4楼2011-06-02 08:18:50
