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请教芽孢杆菌的染色方法
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| 如题,请教高手有关芽孢杆菌的染色方法,如选用的染色试剂(含浓度)种类,使用先后顺序及有关的注意事项等。本人是跨专业背景,请微生物专业的高人指点一下哈,谢过谢过! |
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2楼2011-06-01 19:55:51
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shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
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上面的革兰氏染色主要是针对细胞体的,要想看到芽孢必需得芽孢染色以下为两种方法: 方法1、 (1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定。 (2)滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 (3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10分钟。 (4)倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 (5)用番红水溶液复染1分钟,水洗至水为无色。 (6)待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色。 注意 (1)选用适当菌龄的菌种,幼龄菌尚未形成芽孢,而老龄菌芽孢囊已经破裂。 (2)加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态,加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂,加热不够则芽孢难以着色。 方法2、 (1)取二支洁净的小试管,分别加入0.2ml无菌水,再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔,另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔,两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 (2)在菌悬液中分别加入0.2ml苯酚品红溶液,充分混合后,于沸水浴中加热3—5分钟。 (3)用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上,涂薄,风干后,将载玻片稍倾斜于烧杯上,用95%乙醇冲洗至无红色液流出。 (4)再用自来水冲洗,滤纸吸干。 (5)取1—2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自然干燥后,油镜观察,在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体内的芽孢为红色。 |
3楼2011-06-01 21:31:48
4楼2011-06-02 08:18:50
5楼2011-06-02 14:54:42
6楼2011-06-02 15:14:01
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