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shangyufang

木虫 (小有名气)

[交流] 请教芽孢杆菌的染色方法

如题，请教高手有关芽孢杆菌的染色方法，如选用的染色试剂（含浓度）种类，使用先后顺序及有关的注意事项等。本人是跨专业背景，请微生物专业的高人指点一下哈，谢过谢过！
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1楼 2011-06-01 17:47:34
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springTT

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-06-01 21:00:12
最常用的革兰氏染色法。芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
　　1）涂片固定。
　　2）草酸铵结晶紫染1分钟。
　　3）自来水冲洗。
　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
　　5）水洗，用吸水纸吸去水分。
　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
希望对你有参考价值
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2楼2011-06-01 19:55:51
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zhang860215

金虫 (正式写手)
★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
shangyufang(金币+1): 非常感谢详细的解答。今天就参照此法来试一下。 2011-06-02 09:47:47
上面的革兰氏染色主要是针对细胞体的，要想看到芽孢必需得芽孢染色以下为两种方法：
　方法1、 　　（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 　　（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 　　（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 　　（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 　　（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。 　　（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 　　注意 　　（1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。 　　（2）加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。 　　
方法2、 　　（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 　　（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。 　　（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。 　　（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。 　　（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
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3楼2011-06-01 21:31:48
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小嫩瓜

木虫 (小有名气)
★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
用革兰氏染色就行。可参考《工业微生物实验技术手册》诸葛健 王正祥 编著
上满试剂配法以及操作步骤都有的。

好运！
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4楼2011-06-02 08:18:50
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
芽孢的照片
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5楼2011-06-02 14:54:42
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hanguorui110

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
shangyufang(金币+1):谢谢参与
wolfebst(金币+3, EPI+1): 感谢你的回答 2011-06-02 16:16:23
我这有几篇文献你看看希望对你有帮助


[ Last edited by hanguorui110 on 2011-6-2 at 15:15 ]
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6楼2011-06-02 15:14:01
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好喳喳

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
639431楼: Originally posted by hzlatqh at 2011-06-02 14:54:42
芽孢的照片

看得好清晰呀，可以透露是什么菌吗？
  在什么时期进行的染色（对数期、稳定期）？
  是显微镜放大多少倍观看的？
  
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-04 19:51:49
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hzlatqh

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2462065楼: Originally posted by 好喳喳 at 2012-12-04 19:51:49
看得好清晰呀，可以透露是什么菌吗？
  在什么时期进行的染色（对数期、稳定期）？
  是显微镜放大多少倍观看的？
  ...

图我从网上找来的。。。时期不确定，倍数得1000倍了吧
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8楼2012-12-05 17:09:56
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好喳喳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2462345楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-12-05 17:09:56
图我从网上找来的。。。时期不确定，倍数得1000倍了吧...

好的，谢谢你，嘻嘻
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9楼2012-12-05 19:16:48
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